[发明专利]一种高产纳豆激酶的枯草芽孢杆菌及其应用

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌亚种，保藏编号：CGMCC No.14435，建议的分类命名：枯草芽孢杆菌亚种Bacillus subtilis.。

2.一种利用权利要求1所述的枯草芽孢杆菌亚种制备纳豆激酶发酵液与提纯品中的方法，按照下述步骤进行：

1)含有纳豆激酶发酵液的制备：

将枯草芽孢杆菌亚种Bacillus subtilis subsp.UJS-11菌株接种到LB平板培养基上37℃活化24小时，接种到种子液二次活化后按5％的接种量接种到液体发酵培养基中，37℃，200rpm条件下发酵48h，取发酵液离心，利用琼脂糖——纤维蛋白平板法测得发酵上清液酶活为35850u/ml；

2)纳豆激酶的提纯：

将发酵液在4℃，10000rpm，20min条件下离心，收集发酵上清；向上清液中分多次加入硫酸铵粉末，达到30％饱和度；4℃低速颠倒混合盐析6小时，4℃，10000rpm，20min条件下离心，收集上清液；向上清液中分多次加入硫酸铵粉末，达到75％饱和度；4℃低速颠倒混合盐析6小时，4℃，10000rpm，20min条件下离心，收集沉淀；用适量PH7.2的PBS缓冲液溶解沉淀，-80℃冷冻，送冻干机冻干，收集冻干粉即为高纯度的纳豆激酶粉，利用琼脂糖——纤维蛋白平板法测得高纯纳豆激酶粉酶活为594730u/g。

3.一种可预防心脑血栓疾病的纳豆激酶保健品的的制备方法，按照下述步骤进行：

1)按质量百分比，将干燥后含水量在4-6％的权利要求2所制备的高纯纳豆激酶粉5％，纳豆冻干粉35％，维生素C 10％，乳酸钙10％，枸杞提取物5％，百合提取物5％，麦芽糊精26％在混料机混合均匀；

2)经过公知方法的造粒，干燥后加入4％的硬脂酸镁，混合均匀后，送入压片机压片，每片500mg。