[发明专利]一种基于PCR和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了一种基于PCR和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法，包括如下步骤：步骤1：在磁性微球表面标记能够识别靶标物的抗体或核酸适配体；步骤2：在步骤1得到的磁性微球表面通过抗体或核酸适配体富集靶标物；步骤3：将能够特异性识别靶标物的DNA标记物与步骤2得到的磁性微球的靶标物结合；步骤4：将磁性微球表面的带有抗体或核酸适配体‑靶标物‑DNA标记物的三明治结构分离，并通过PCR或等温扩增法扩增DNA标记物；步骤5：检测扩增后的DNA标记物，得到靶标物的浓度结果。该方法检测特异性高、检测精度高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是一种基于PCR和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法。

背景技术

恶性肿瘤是一种以细胞异常增生为基本特征的人类疾病。伴随着肿瘤的发生发

展，其大分子物质(包括核酸、蛋白和多糖等)可以由癌细胞释放进入血液循环，此类游离(Circulating)大分子作为生物标志物(Biomarkers)在肿瘤诊断、预后评估及病情随访中均具有广泛的临床价值。

但是现有的基于磁珠抗体富集技术的检测方法普遍存在检测精度低的问题，无法实现痕量检测。

发明内容

为了解决上述的缺点和不足，本发明提供了一种检测精度高的基于PCR和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法。

其具体方案为：一种基于PCR和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法，包括如下步骤：

步骤1：在磁性微球表面标记能够识别靶标物的抗体或核酸适配体；

步骤2：在步骤1得到的磁性微球表面通过抗体或核酸适配体富集靶标物；

步骤3：将能够特异性识别靶标物的DNA标记物与步骤2得到的磁性微球的靶标物结合；

步骤4：将磁性微球表面的带有抗体或核酸适配体-靶标物-DNA标记物的三明治结构分离，并通过PCR或等温扩增法扩增DNA标记物；

步骤5：检测扩增后的DNA标记物，得到靶标物的浓度结果。

在上述的基于PCR和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法中，靶标物为细菌、病毒、病原体、细胞或蛋白质。

在上述的基于PCR和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法中，步骤1的磁性微球为经过羧基化的磁性微球。

在上述的基于PCR和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法中，所述的DNA标记物为末端带有氨基或羧基的单链核酸。

在上述的基于PCR和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法中，所述的步骤2中抗体或核酸适配体与靶标物的偶联、步骤3中靶标物和DNA标记物的偶联均通过碳化二亚胺进行偶联。

在上述的基于PCR和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法中，所述的步骤5中扩增后的DNA标记物通过荧光定量方法或核酸胶体金检测卡进行检测。

在上述的基于PCR和磁珠抗体富集技术的快速检测靶标物的方法中，所述的磁性微球的粒径为25nm。

本发明的有益效果在于：

本发明通过PCR和磁珠抗体富集技术进行结合，可以对靶标物实现痕量检测，检测精度高。

附图说明

图1为本发明实施例1的灵敏度实验结果图；

图2为本发明实施例1的特异性实验结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。