[发明专利]中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒

权利要求书

1.一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，其特征在于：由彼此独立的试剂R1和试剂R2组成；所述每1升试剂R1中各组分的用量为：三羟甲基氨基甲烷12.114g，聚乙二醇6000 4g，吐温20 10ml，氯化钠15g；所述每1升试剂R2中各组分的用量为：包被中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的乳胶颗粒8mg，三羟甲基氨基甲烷12.114g，牛血清蛋白1g，叠氮化钠1g，聚六亚甲基胍0.5g，苯甲醇0.2g；所述的乳胶颗粒为粒径0.8-1.3μm的聚苯乙烯乳胶颗粒。

2.按照权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述包被中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的乳胶颗粒的制备方法为：

(1)用MES缓冲液将表面带有羧基功能基团、直径0.5-1.5μm的聚苯乙烯微粒稀释至终浓度为0.5-3％(wt)，加入50-90mM EDAC，混合均匀，室温震荡反应30-80分钟；

(2)将步骤(1)所得混合液离心，弃上清液，用MES缓冲液清洗两次，最终胶乳微粒重悬于MES缓冲液，超声进行分散，得微粒分散液；

(3)用MES缓冲液稀释中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体，与步骤(2)中微粒分散液混合，于室温反应2-4小时；

(4)将步骤(3)所得反应液18000rpm离心30min后，用Tris缓冲液重悬微粒，室温封闭反应1-3小时；

(5)将步骤(4)所得反应液离心，弃上清液，用Tris缓冲液清洗胶乳3次，最后用R2试剂保存液重悬胶乳沉淀并稀释至1％，超声充分分散后即获得包被中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的乳胶颗粒。

3.按照权利要求1或2的检测试剂盒，其特征在于：试剂R1的pH值范围为6.5-8.5。

4. 按照权利要求1或2的检测试剂盒，其特征在于：其在使用时，检测主波长为570nm，副波长为800nm，测定方法采用终点法：150μl试剂R1加入3μl样本，于37℃温育5min后加入50μl试剂R2 36s开始读数，4.5min后再次读数，然后计算吸光度算差值。