[发明专利]中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒

说明书

本发明属于医学及生物化学技术领域，具体是一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒。该试剂盒由试剂R1和试剂R2组成，试剂R1包括：生物缓冲剂、促凝剂、表面活性剂、渗透压调节剂和水；试剂R2包括：包被中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体的乳胶颗粒、生物缓冲剂、封闭剂、防腐剂和水。该中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒采用胶乳增强比浊法来进行测定，相对于传统的NGAL检测试剂盒，具有快速灵敏、准确性好、特异性高、稳定性好等优点。

技术领域

本发明涉及医学及生物化学技术领域，具体是一种测定中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的试剂盒。

背景技术

近年来，随着人民生活水平提高，以及生活习惯和饮食习惯改变，肾病的发病率逐年增高。肾脏疾病大多病因复杂、病程迁延，并且具有增加心血管疾病的危险性，已经 成为全球性公共健康问题。肾脏疾病可分为两个主要的症候群——急性肾损伤(acute kidneyinjury，AKI)和慢性肾脏病(chronic kidney disease，CKD)。AKI是指突发 和持续的肾功能下降的一组临床综合征，表现为氮质血症、水电解质和酸碱平衡紊乱以 及全身各系统症状，可伴有少尿或无尿，是临床常见的急危重症之一。而且AKI与随后 发生的CKD具有显著地相关性，AKI可能导致CKD的发生。2012年，王海燕教授等在《柳 叶刀》杂志上发表的首个全国性CKD横断面调查表明，中国CKD患病率高达10.8％，患 者预计近1.2亿，但CKD发病往往隐匿，在出现明显临床症状之前患者大多数经历了较 长的隐袭阶段。因此寻找一种可靠的生物标志物，在肾脏疾病发展早期进行有效诊断， 对其治疗和预后具有十分重要的临床意义。

近年研究发现，脂质运载蛋白家族中的一个新成员——中性粒细胞明胶酶相关脂质 运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL)，与AKI及CKD密 切相关，是预测AKI的一个新型标记物，同时也是监测CKD进展和肾功能损害的生物学 指标。NGAL由Kjeldsen等在1993年研究人类中性粒细胞时发现，人类NGAL基因为单 顺反子，定位于第9号染色体长臂(9q34)上，全长5869bp，包括1695bp的5’端非 转录区、178bp的3’端非转录区及3696bp的原始转录区。与脂质运载蛋白家族其他成 员相似，NGAL蛋白具有一个保守的三级结构，该结构使得NGAL有能力结合一些主要由 疏水性小分子形成的复合物，甚至还可以在细胞表面结合特异性受体。NGAL能运输介导 炎症反应的一些亲脂性分子，如血小板活化因子(PAF)、白三烯B4(LTB4)和脂多糖(LPS) 等；调节MMP-9活性，并可能参与清除炎症介质，调节免疫反应，抑制细胞凋亡以及肿 瘤的发生发展、浸润转移等过程；通过与含铁的铁载体结合，形成NGAL-铁载体-铁复合 物，参与肾脏的发生、发展及修复过程。在正常的生理状态下，除了中性粒细胞以外，NGAL在人类很多组织如支气管、胃、小肠、胰腺、肾脏等的上皮细胞中有低水平表达。 而在病理状态下，这些组织的上皮细胞则有大量NGAL表达，特别是在损伤的近端肾小 管上皮细胞中。因此通过检测NGAL的含量，可以很好地预测及诊断AKI及CKD。

目前NGAL的检测方法主要有酶联免疫法、放射免疫法、化学发光法以及胶乳免疫比浊法。酶联免疫法自动化程度不高，且受人为因素影响较大；放射免疫法存在着环境 污染问题；化学发光法灵敏度虽高，但测定线性范围较小且检测成本较高，需要特定化 学发光检测仪；普通透射比浊法存在灵敏度不够的缺点。上述方法均难以满足临床实验 室快速、大批量检测的需求。

胶乳增强比浊法是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测 方法。胶乳增强比浊法通过在高分子乳胶微球表面交联的单克隆抗体，而当抗原与交联有抗体的微球结合后，能够在短时间内迅速聚集在一起，改变反应溶液的吸光度。而且， 反应液吸光度的改变与被测抗原的浓度在一定范围内具有线性关系，可用来反映被测抗 原的浓度。胶乳免疫比浊法与上述其他几种方法相比较，存在操作简单、灵敏度高、线 性范围宽、无污染、应用范围广等显著的特点，因此，胶乳免疫比浊法有着极大的研究 价值。