[发明专利]一种用于HER-2基因拷贝数扩增检测的核酸序列、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于检测HER-2基因扩增的核酸序列，其特征在于，包括如下引物对及探针：

(1)扩增HER-2基因扩增的引物序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1～2所示；

(2)扩增HER-2基因的探针序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；

(3)扩增21-TFF3-S基因的引物序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：4～5所示；

(4)扩增21-TFF3基因的探针序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示；

(5)扩增21-TFF3-L基因的引物序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：7～8所示；

其中，HER-2探针SEQ ID NO：3序列的5’端标记FAM荧光基团，3’端标记MGB淬灭基团，21-TFF3基因探针SEQ ID NO：6序列的5’端标记VIC荧光基团，3’端标记MGB淬灭基团，上述8条核酸序列在一次2孔检测中使用。

2.一种用于检测HER-2基因扩增的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括如下试剂：

(1)2*supermix：该PCR反应液中含有DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反应缓冲液、dATP、dCTP、dTTP和dGTP等；

(2)引物探针预混合液：将SEQ ID NO：1～8所示的引物及探针各自用双蒸水溶解，每条引物的浓度为100μM，每条探针的浓度为10μM；SEQ ID NO：1～3各核酸序列的母液以9:9:25的比例混合；SEQ ID NO：4～6各核酸序列的母液以9:9:25的比例混合；SEQ ID NO：6～8各核酸序列的母液以25:9:9的比例混合，最终形成引物/探针在反应体系中的浓度为900/250nM；

(3)阳性对照：FISH检测为HER-2基因簇状扩增的福尔马林浸泡的石蜡组织样本FFPE；

(4)阴性对照：FISH检测为HER-2基因不扩增的福尔马林浸泡的石蜡组织样本FFPE。

3.根据权利要求2所述用于检测HER-2基因扩增的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照中，HER-2基因拷贝数/人21-TFF3-S基因拷贝数R_S≥1.8，HER-2基因拷贝数/人21-TFF3-L基因拷贝数R_L≥2.5。

4.根据权利要求2所述检测HER-2基因扩增的试剂盒，其特征在于，所述阴性对照中，HER-2基因拷贝数/人21-TFF3-S基因拷贝数R_S＜1.8，HER-2基因拷贝数/人21-TFF3-L基因拷贝数R_L＜2.5。