[发明专利]体液样本中稀有肿瘤细胞的检测分型方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种对体液样本中高代谢活性稀有肿瘤细胞的非诊断性的检测分型方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤A，将体液样本中的有核细胞与能够产生荧光信号的第一代谢标志物和能够产生荧光信号的第二代谢标志物共同孵育；

步骤B，通过高通量成像检测所有细胞所摄取代谢标志物的荧光信号，从而确定所述细胞的能量代谢方式与强度；

步骤C，根据代谢标志物组合的荧光信号鉴定体液样本中高代谢活性的肿瘤细胞并进行基于代谢方式的分型；

所述能够产生荧光信号的第一代谢标志物为荧光标记的葡萄糖类似物，所述能够产生荧光信号的第二代谢标志物为氧化还原标志物；所述能够产生荧光信号的氧化还原标志物为刃天青。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述体液样本选自血液、胸水、腹水或脑脊液的一种，所述体液样本中的有核细胞与能够产生荧光信号的代谢标志物孵育的时间为2分钟至2小时。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光标记的葡萄糖类似物是2-NBDG。

4.如权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，在步骤A中，还包括加入针对白细胞表面共同抗原的荧光修饰抗体。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤A中，还包括加入APC标记的CD45抗体。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤A中，将体液样本中的所述有核细胞加到微孔阵列芯片，所述芯片包括多个用于容纳细胞且可以被寻址的微孔。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，鉴别高代谢肿瘤细胞的2-NBDG的阳性截取值为所有CD45阳性细胞2-NBDG荧光值平均值加5倍标准差，刃天青的阳性截取值为所有CD45阳性细胞刃天青荧光值平均值加3倍标准差。

8.一种用于体液样本中稀有肿瘤细胞检测分型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

a、微孔阵列芯片，所述芯片包括多个用于容纳细胞且可以被寻址的微孔；

b、能够产生荧光信号的第一代谢标志物；

c、能够产生荧光信号的第二代谢标志物；

d、针对白细胞表面共同抗原的荧光修饰抗体，用于标记样本中的白细胞；

所述能够产生荧光信号的第一代谢标志物为荧光标记的葡萄糖类似物，所述能够产生荧光信号的第二代谢标志物为氧化还原标志物，所述氧化还原标志物为刃天青，所述针对白细胞表面共同抗原的荧光修饰抗体为APC标记的CD45抗体。

9.如权利要求8所述的用于体液样本中稀有肿瘤细胞检测分型的试剂盒，其特征在于，所述荧光标记的葡萄糖类似物是2-NBDG。

10.如权利要求8所述的用于体液样本中稀有肿瘤细胞检测分型的试剂盒，其特征在于，所述微孔阵列芯片上微孔的数目为0.5万至50万个，所述微孔阵列芯片上微孔的底部是

封闭的或有一个或多个尺寸为5微米至10微米的微孔。