[发明专利]一种细胞反应器微载体细胞收获及再接种放大方法

权利要求书

1.一种细胞反应器微载体细胞收获及再接种放大方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤101：将微载体细胞过滤收集；

步骤102：培养基去除缓冲液平衡；

步骤103：胰酶消化；

步骤104：细胞微载体分离，只收集细胞或加入下一级微载体接种放大；

所述步骤101中，将微载体细胞过滤收集是指：把种子细胞反应器中微载体连同贴附于微载体上处于对数生长期的细胞，通过蠕动泵转移到可摇动微载体细胞分离腔体中；可摇动微载体细胞分离腔体中，设置有微载体截留滤网和消化后细胞收获滤网；所述微载体截留滤网，用于阻挡截留微载体和细胞以及培养基及细胞碎片；所述消化后细胞收获滤网，用于只收集细胞；微载体截留滤网,阻挡微载体和细胞，培养基及细胞碎片透过微载体截留滤网，无菌空气吹干；所述微载体截留滤网上的孔径为10-30um纤维素滤板，采用摇动过滤的方式，阻挡微载体和贴附细胞，滤除培养基中的血清及细胞碎片；可摇动微载体细胞分离腔体为316不锈钢制作直径为60cm，高为10cm容纳不大于20L微载体和细胞，底部设置有微载体截留滤网，顶部设置有消化后细胞收获滤网；

所述步骤102中，所述培养基去除缓冲液平衡是指：在摇动状态下用无钙镁离子缓冲液冲洗微载体中残存的血清和胰酶抑制剂；

所述步骤103中，胰酶消化是指：加入胰酶消化随后摇动滤器使细胞与微载体分离，随后用含血清的培养基反向冲洗同时灭活胰酶；

所述步骤104中，细胞微载体分离，只收集细胞或加入下一级细胞反应器接种放大是指：通过消化后细胞收获滤网只收集从出口出来的细胞；摇动状态下，微载体比重大于细胞，从下向上培养基带着细胞透出细胞收获滤网，作为种子进入下一级细胞反应器；消化后细胞收获滤网为316不锈钢滤网100um；细胞平均粒径10um,微载体粒径100-300um；消化后的细胞透过细胞收获滤网，而微载体截留，在摇动混合状态下，液流向上分离状态，细胞收率高于向下过滤收获状态。