[发明专利]一种细胞反应器微载体细胞收获及再接种放大方法

说明书

本发明提供一种细胞反应器微载体细胞收获及再接种放大方法，包括步骤101：将微载体细胞过滤收集；步骤102：培养基去除缓冲液平衡；步骤103：胰酶消化；步骤104：细胞微载体分离，只收集细胞或加入下一级微载体接种放大。本发明解决了生产规模微载体收集，细胞可控消化，以及细胞收获微载体分离，球转球放大的问题。本发明的方法适合贴壁细胞制备生产，应用于疫苗、重组蛋白及生物酶中试及生产，并且本方法简单经济。

技术领域

本发明属于细胞反应器大规模微载体细胞培养放大工艺，尤其涉及的5 是一种细胞反应器微载体细胞收获及再接种放大方法。

背景技术

微载体细胞反应器悬浮培养制备病毒疫苗，是WHO和CFDA推荐疫苗生产模式。国外用于细胞流感疫苗生物反应器体积已超过6000L,国内微载体悬浮培养反应器也超过300L。微载体悬浮培养虽然具有自动化便于监控稳定重复生产过程等优点，但放大过程需要将细胞从微载体上消化下来，然后将细胞和旧微载体与下一级培养新微载体共同进入下一级反应器中，形象说是细胞球转球或倒罐。生产放大方式是反应器停止搅拌，微载体自然沉降，吸出多余培养液，加入胰酶静置消化后，加入胰酶灭活剂后共同推入下一级反应器。为接种下一级微载体需要保持细胞活性状态，而微载体静置导致细胞缺氧，胰酶消化的时间控制不好损伤细胞。

目前现有的ThermoFisher公司有收集微载体细胞的商品细胞收集袋出售，主要用于几十升实验及中试规模，收集袋腔体小，微载体容易堵塞堆积，消化好的细胞不能全部透出收集，并且此收集袋不透气，细胞消化过程需要控制，防止细胞缺氧。

因此，为实现疫苗生产安全放大，提高工艺可靠性和可重复，提高细胞收率克服现有技术缺陷，发明微载体球转球消化放大方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种细胞反应器微载体细胞收获及再接种放大方法。

本发明的技术方案如下：

一种细胞反应器微载体细胞收获及再接种放大方法，包括以下步骤：

步骤101：将微载体细胞过滤收集；

步骤102：培养基去除缓冲液平衡；

步骤103：胰酶消化；

步骤104：细胞微载体分离，只收集细胞或加入下一级微载体接种放大。

所述的方法，所述步骤101中，将微载体细胞过滤收集是指：把种子细胞反应器中微载体连同贴附于微载体上处于对数生长期的细胞，通过蠕动泵转移到可摇动微载体细胞分离腔体中；微载体截留滤网,阻挡微载体和细胞，培养基及细胞碎片透过微载体截留滤网，无菌空气吹干。

所述的方法，所述步骤102中，所述培养基去除缓冲液平衡是指：在摇动状态下用无钙镁离子缓冲液冲洗微载体中残存的血清和胰酶抑制剂。

所述的方法，所述步骤103中，胰酶消化是指：加入胰酶消化随后摇动滤器使细胞与微载体分离，随后用含血清的培养基反向冲洗同时灭活胰酶。

所述的方法，所述步骤104中，细胞微载体分离，只收集细胞或加入下一级细胞反应器接种放大是指：通过消化后细胞收获滤网只收集从出口出来的细胞；摇动状态下，微载体比重大于细胞，从下向上培养基带着细胞透出细胞收获滤网，作为种子进入下一级细胞反应器。

本发明解决生产规模微载体收集，细胞可控消化，以及细胞收获微载体分离，球转球放大的问题。本方法适合贴壁细胞制备生产，应用于疫苗、重组蛋白及生物酶中试及生产，并且本方法简单经济。

附图说明

图1为本发明实施例１中细胞反应器微载体细胞收获及再接种放大装置的结构示意图。

图2为本发明的方法流程图。

具体实施方式