[发明专利]甘蓝型油菜雌雄不育系Bnmfs利用分子标记筛选的引物及方法

说明书

本发明属于油菜育种技术领域，公开了一种甘蓝型油菜雌雄不育系Bnmfs利用分子标记筛选的引物及方法，序列为：SEQ ID NO：1‑SEQ ID NO：22。本发明筛选的分子标记是不育系Bnmfs的不育基因两侧紧密连锁的标记，缩小了不育基因在甘蓝型油菜染色体的区间，为后续该基因的克隆奠定基础；筛选的分子标记，特异性强、稳定性高，并且标记的筛选方法操作简单；筛选了共显性标记，能鉴别分离群体中显性纯合、杂合和隐性纯合单株，可以克服传统育种依靠表型进行选择的特点，减少育种工作量，缩短育种年限，加快育种进程。

技术领域

本发明属于油菜育种技术领域，尤其涉及一种甘蓝型油菜雌雄不育系Bnmfs利用分子标记筛选的引物及方法。

背景技术

在甘白种间杂交后代中，首次发现雌雄同时败育的性状，由一对隐性基因控制，该不育系定名为Bnmfs，并且进行基因定位。2009年，四川农业大学李平课题组发现了一份雌雄不育的水稻突变体MFS-Z9，并且定位到水稻第2号染色体上，其它作物中，如：小麦、大豆等作物中发现了雌雄不育的植株，但是主要集中在细胞学研究上。根据目前研究，甘蓝型油菜雌雄不育基因无连锁的标记，其它作物的标记也无法应用到该材料中。利用1536对AFLPs(EcoRI/MseI,PstI/MseI,ScaI/MseI)标记和917对SSR标记(来源于http://www.brassica.info/resource/markers/ssr-exchange.php,http://brassicadb.org/brad/geneticMarker.php)在2:2(不育：可育)混池(各取10株)的F₂衍生群体(近等基因系)中筛选，得到7对AFLP标记和1对SSR标记有多态性。在F₇群体的614株单株中也能找到多态性。7对AFLP标记测序后Blast分析，其中4对无法与甘蓝型油菜基因组比对，2对比对到甘蓝型油菜C9染色体上，1对比对到甘蓝型油菜C4染色体上；1对SSR标记比对到甘蓝型油菜C3染色体上。

从上面结论看出，传统的方法无法快速定位，利用重测序技术对雌雄不育植株和纯合可育植株进行BSA(集团分离分析法)测序，各取20个单株，得到三个差异区间，都在甘蓝型油菜C3染色体上。根据重测序结果获得的三个差异区间的SNP设计InDel标记以及1对SSR引物2Mb范围内设计SSR引物共220对，获得11对多态性标记(InDel标记6对，SSR标记5对)，其中重测序的两个区间没有多态性标记，排除这两个区间，限定在1.11Mb(45.34-46.45Mb)的区间内。

现有技术存在的问题及解决方法：由于得到雌雄不育突变体为隐性突变，而且雌雄都不育，所以只有杂合单株通过自交，才能分离出不育单株，另外，筛选得到的多态性标记在955株不育单株中验证，有较高的交换率，这可能与F₂衍生群体有较大的遗传背景噪音引起的。通过基因组重测序和转录组测序以及结合传统的标记分析，能够确定雌雄不育候选基因。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种甘蓝型油菜雌雄不育系Bnmfs利用分子标记筛选的引物及方法。