[发明专利]一种小鼠骨髓造血干/祖细胞体外衰老细胞模型的建立方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，提供了一种小鼠骨髓造血干/祖细胞体外衰老细胞模型的建立方法，包括如下步骤：分离获取小鼠的骨髓造血干/祖细胞；用加入IL3、IL6和SCF的干细胞培养基培养5～14天。通过本方法可以快速获得大量衰老的体外造血干细胞/祖细胞，而且操作方法简单，成本低；同时，所获得的衰老细胞模型不易凋亡，在模型建立后仍可存活较长时间，可以用来筛选抗衰老的药物，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术以及医药领域，涉及一种体外细胞衰老模型的建立方法，特别针对小鼠骨髓造血干/祖细胞的体外衰老细胞模型的制备方法。

背景技术

最新研究表明，造血干/祖细胞衰老与机体的衰老有着密切的联系，它可以引起机体造血功能和免疫功能的衰退、肿瘤发生率增加，并将导致全身组织器官结构与功能的衰退。因此，深入研究造血干细胞衰老的机理对预防和治疗老年性疾病有着重要理论意义与临床应用价值。

而造血干/祖细胞衰老模型的建立是研究造血干细胞衰老机理与延缓其衰老的重要途径。由于造血干细胞的数量仅占骨髓有核细胞的0.5％左右，因此体外分离高纯度的足量的HSC是国内外学者遇到的一个共同的技术难题。而造血干细胞体外衰老模型的建立就更加不易。

目前造血干细胞体外衰老模型主要有老年鼠造血干细胞模型(EmmanuellePassegué,University of California San Francisco,et al)，白消安体外诱导造血干细胞衰老模型(Daohong Zhou,Medical University of South Carolina,et al)，辐射致造血干细胞衰老模型(Daohong Zhou,Medical University of South Carolina,et al),t-BHP体外诱导造血干细胞衰老模型(Wang YP,Chongqing Medical University)。这些方法都不同程度地存在着实验周期耗时长，操作步骤繁琐，不易普及等局限。

因此需要对现有技术加以改进，用较为年轻的小鼠为来源，提供一种快速简便的方法获得小鼠骨髓造血组/干细胞(HSC)体外衰老细胞模型。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种体外细胞衰老模型的建立方法，特别针对小鼠骨髓造血干/祖细胞的体外衰老细胞模型的制备方法。

小鼠骨髓造血干/祖细胞体外衰老细胞模型的建立方法，步骤包括:分离获取小鼠的骨髓造血干/祖细胞；用加入IL3、IL6和SCF的干细胞培养基培养5～14天。

所述的干细胞培养基中，IL3的含量为8～20ng/mL，IL6的含量为8～20ng/mL，SCF的含量为25～60ng/mL。优选的，所述的干细胞培养基中，IL3的含量为9～12ng/mL，IL6的含量为9～12ng/mL，SCF的含量为27～35ng/mL。

优选的，所述的培养时间为5～10天，更优选为8天。培养条件为3％～6％CO₂、36～37.5℃；优选为5％CO₂、37℃±0.2℃。

在培养过程中，每2～3天更换干细胞培养基。

优选的，所述的干细胞培养基为无血清培养基，例如stemspan SFEM。

所述的干细胞培养基中还含有链霉素和青霉素。

小鼠骨髓干/祖细胞通过以下方法获得：从小鼠骨髓中获取分离小鼠骨髓细胞，并经过lineage阴性富集和CD117阳性筛选；所述的lineage阴性富集为CD5、CD45R/B220、CD11b、Anti-Gr-1、7-4和Ter-119阴性富集。