[发明专利]一种肿瘤预后预测标志物及其检测方法

权利要求书

1.一种肿瘤预后预测标志物，其特征在于，所述肿瘤预后预测标志物为淋巴结组织。

2.一种肿瘤预后预测标志物的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)制作淋巴结组织石蜡切片；

2)脱蜡和水化；

石蜡切片先后置于新鲜的二甲苯中浸泡2次、15分钟/次，无水乙醇中浸泡2次、3分钟/次，分别在95％、85％艺醇中浸泡3分钟，用自来水冲淋1分钟；3)高压加热巧樣酸组织抗原修复液；

加热巧樣酸组织抗原修复液至沸腾；将脱蜡和水化后的切片放入置于耐高温染色架上的压力锅中，加热至喷汽，2分钟后，压力锅离开热源，自然冷却5分钟；用自来水冲洗使其冷却，待自然冷却至室温后取出切片；用蒸馈水冲洗2次、3分钟/次；再用PBS溶液冲洗3次、3分钟/次；

4)阻断内源性过氧化物酶；

将步骤3)得到的切片除去PBS溶液，加100mL内源性过氧化物酶阻断剂，室温下培育10分钟，PBS溶液冲洗3次、3分钟/次；

5)加Ki67、CD19、CD20及CD3一抗或空白对照试剂；

将步骤4)得到的切片除去PBS溶液，加100mL的Ki67、CD19、CD20及CD3一抗或空白对照试剂，室温下培育60分钟，PBS溶液冲洗3次、3分钟/次；

6)加酶标聚合物；

将步骤5)得到的切片除去PBS液，加100mL的ki67、CD19、CD20及CD3二抗，室温下培育15分钟，PBS溶液冲洗3次、3分钟/次；

7)显色；

将步骤6)得到的切片除去PBS溶液，加100-200mL DAB显色液，培育3-5分钟；

8)复染；

将步骤7)得到的切片用自来水冲洗，加100-200mL苏木素体细胞染色液培育10-30秒；PBS溶液或自来水冲洗反蓝；

9)脱水、透明、封片；

85％、95％、无水乙醇中分别浸泡3分钟，二甲苯透明，中性树胶和盖玻片封片；

10)评价；

对步骤9)得到的切片采用光学显微镜进行观察，计算阳性细胞数占总细胞数的百分数；分组标准为：20％为低表达组，25％-50％为中表达组，51％-75％为高表达组，>75％为极高表达组。

3.根据权利要求2所述的肿瘤预后预测标志物的检测方法，其特征在于，步骤10)中，CD19、CD20及CD3阳性判断标准为：细胞膜呈棕黄染色为阳性；无细胞染色为(－)；任何比例的浸润癌细胞呈微弱、不完整的细胞膜着色为(+)；＞10％的浸润癌细胞呈弱至中等强度、完整但不均匀的细胞膜棕黄色着色，或﹤30％的浸润性癌细胞呈强且完整的细胞膜棕褐着色为(++)；＞30％的浸润癌细胞呈强的、完整的细胞膜棕褐色着色为(+++)。