[发明专利]一种肿瘤预后预测标志物及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及预后预测技术领域，特别涉及一种肿瘤预后预测标志物及其检测方法。

背景技术

人类在征服肿瘤的过程中已认识到，要想真正战胜肿瘤，主要应该从两个方面入手：一是肿瘤是怎样发生的，也就是对病因学的研究，从而采取有效的预防；二是如何能早期发现肿瘤，从而采取有效的、有针对性的治疗。实际上无论是病因的基础研究或者是临床诊断和治疗研究，都是为了延长患者的生存时间和提高生存质量，使患者有一个好的预后。因此，加强对肿瘤预后规律的探索是非常必要的。

现有技术中的肿瘤预后预测标志物包括：蛋白、信使RNA、DNA、microRNA、代谢产物，或这类生物分子的整合。迄今为止研究最多的还是蛋白，因为蛋白一般可以通过免疫组化评估。在J ThoracCardiovasc Surg杂志中发表了日本Gunma大学医学院Shimizu教授等人的回顾性研究文章：对一组肺腺癌患者的肿瘤标本通过免疫组化评估stathmin 1(STMN1)的表达；该蛋白在其他肿瘤中参与细胞增殖的调节。该文称他们观察到肺腺癌中STMN1的阳性率为54％。临床病理相关性方面他们确定STMN1蛋白高表达与微血管密度及淋巴管血管侵犯之间具有独特的联系。尽管该文表明STMN1在肺腺癌预后预测中前景极佳，但过去30年里有数百篇报道既未检出、也未充分证实单一蛋白性肺癌标志物可用于临床。实际上免疫组化基础上的检测常出现不一致、甚至相反的结论。

淋巴结是人体重要的免疫器官，包括恶性肿瘤在内的多种因素均可引起淋巴结反应增生性肿大。肿瘤细胞一方面在恶变过程中由于癌相关基因的过表达或基因的激活产生新的蛋白分子，其降解为短肽后可以与主要组织相容性复合体类分子结合并表达于细胞表面，形成肿瘤特异抗原；另一方面，在癌变的过程中可以使处于隐敝状态的抗原决定簇暴露出来，形成肿瘤相关抗原，进而引发免疫反应。

目前，国内外关于区域性淋巴结反应性增生与恶性肿瘤预后的相关性研究罕有报道。

发明内容

本发明要解决现有技术中的技术问题，提供一种肿瘤预后预测标志物及其检测方法。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案具体如下：

一种肿瘤预后预测标志物，所述肿瘤预后预测标志物为淋巴结组织。

一种肿瘤预后预测标志物的检测方法，包括以下步骤：

1)制作淋巴结组织石蜡切片；

2)脱蜡和水化；

石蜡切片先后置于新鲜的二甲苯中浸泡2次、15分钟/次，无水乙醇中浸泡2次、3分钟/次，分别在95％、85％艺醇中浸泡3分钟，用自来水冲淋1分钟；3)高压加热巧樣酸组织抗原修复液；

加热巧樣酸组织抗原修复液至沸腾；将脱蜡和水化后的切片放入置于耐高温染色架上的压力锅中，加热至喷汽，2分钟后，压力锅离开热源，自然冷却5分钟；用自来水冲洗使其冷却，待自然冷却至室温后取出切片；用蒸馈水冲洗2次、3分钟/次；再用PBS溶液冲洗3次、3分钟/次；

4)阻断内源性过氧化物酶；

将步骤3)得到的切片除去PBS溶液，加100mL内源性过氧化物酶阻断剂，室温下培育10分钟，PBS溶液冲洗3次、3分钟/次；

5)加Ki67、CD19、CD20及CD3一抗或空白对照试剂；

将步骤4)得到的切片除去PBS溶液，加100mL的Ki67、CD19、CD20及CD3一抗或空白对照试剂，室温下培育60分钟，PBS溶液冲洗3次、3分钟/次；

6)加酶标聚合物；

将步骤5)得到的切片除去PBS液，加100mL的ki67、CD19、CD20及CD3二抗，室温下培育15分钟，PBS溶液冲洗3次、3分钟/次；

7)显色；

将步骤6)得到的切片除去PBS溶液，加100-200mL DAB显色液，培育3-5分钟；

8)复染；

将步骤7)得到的切片用自来水冲洗，加100-200mL苏木素体细胞染色液培育10-30秒；PBS溶液或自来水冲洗反蓝；

9)脱水、透明、封片；

85％、95％、无水乙醇中分别浸泡3分钟，二甲苯透明，中性树胶和盖玻片封片；

10)评价；

对步骤9)得到的切片采用光学显微镜进行观察，计算阳性细胞数占总细胞数的百分数；分组标准为：20％为低表达组，25％-50％为中表达组，51％-75％为高表达组，>75％为极高表达组。