[发明专利]DNA分子、表达载体、重组菌及其构建方法，以及羟脯氨酸的制备方法有效
| 申请号： | 201711165839.0 | 申请日： | 2017-11-21 |
| 公开（公告）号： | CN109810989B | 公开（公告）日： | 2021-07-06 |
| 发明（设计）人： | 温廷益;张宇;张芸;商秀玲;刘树文 | 申请（专利权）人： | 中国科学院微生物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/54 | 分类号： | C12N15/54;C12N15/53;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/15;C12P13/24 |
| 代理公司： | 北京律和信知识产权代理事务所(普通合伙) 11446 | 代理人： | 武玉琴;鲍晓芳 |
| 地址： | 100101 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | dna 分子 表达 载体 重组 及其 构建 方法 以及 羟脯氨酸 制备 | ||
【权利要求书】：
1.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有脯氨酸4-羟化酶编码基因和位于其上游的RBS1，5-磷酸谷氨酸激酶编码基因和位于其上游的RBS序列；
所述RBS1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，脯氨酸4-羟化酶编码基因序列如SEQ IDNO.2所示，
所述RBS序列为AAAGGAGGA或如SEQ ID NO.4所示，5-磷酸谷氨酸激酶编码基因如SEQID NO.3所示。
2.一种生产羟脯氨酸的重组菌，其特征在于，所述重组菌含有权利要求1所述的表达载体，以及
所述重组菌的琥珀酰辅酶A合成酶编码基因失活，或其调控元件为低转录或低表达活性的调控元件。
3.一种权利要求2重组菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：
在出发菌中转入权利要求1所述的表达载体，
所述出发菌为能够积累羟脯氨酸的菌株。
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：
降低所述出发菌中琥珀酰辅酶A合成酶的表达，通过如下至少一种方式实现：失活所述出发菌中琥珀酰辅酶A合成酶编码基因，
或所述出发菌中琥珀酰辅酶A合成酶编码基因的调控元件被替换为低转录或低表达活性的调控元件。
5.一种羟脯氨酸的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：发酵权利要求2的重组菌。
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