[发明专利]区分免疫和感染动物H5亚型禽流感疫苗株及其制备方法和应用

权利要求书

1.标签基因序列在制备区分免疫和感染A型流感病毒的H5亚型禽流感疫苗株中的应用，将标签基因序列与H5亚型禽流感病毒的HA基因或突变的H5亚型HA基因；通过反向遗传操作系统获救得到重组疫苗株，区分免疫和感染A型流感病毒的H5亚型禽流感疫苗株；

所述标签基因序列为编码B型流感病毒NA蛋白胞外区氨基酸序列的DNA序列；

或者，所述标签基因序列为B型流感病毒NA基因中编码胞外区氨基酸序列的DNA序列；

或者，所述标签基因序列为编码B型流感病毒NA蛋白的DNA序列；

或者，所述标签基因序列为B型流感病毒NA基因的DNA序列；

所述H5亚型禽流感疫苗株中还含有H5亚型HA基因或突变的H5亚型HA基因。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述突变的H5亚型HA基因能够将野生型HA蛋白中的氨基酸序列RERRRKRGLF突变为RETRGLF。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述B型流感病毒选自Victoria群和Yamagata群的B型流感病毒。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述B型流感病毒具体选自病毒株B/Massachusetts/2/2012，B/Brisbane/60/2008，B/Yamagata/16/1988，B/Malaysia/2506/04。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述标签基因序列两端还含有包装信号序列，所述包装信号为A型流感病毒H1亚型NA的包装信号。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述标签基因序列两端还含有包装信号序列，其中5′端包装信号序列包括非编区序列、胞内区序列、跨膜区序列。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，胞内区序列编码5～7个氨基酸，氨基酸序列位于胞内。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，跨膜区序列编码24～32个氨基酸，氨基酸序列位于跨膜区。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述标签基因序列的5′端包装信号序列为SEQ ID NO:3。

10.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述标签基因序列两端还含有包装信号序列，其中3′端包装信号序列为SEQ ID NO:4。

11.一种制备区分免疫和感染A型流感病毒的H5亚型禽流感疫苗株的方法，其特征在于，包括以下步骤：将标签基因序列与H5亚型禽流感病毒的HA基因或突变的H5亚型HA基因；通过反向遗传操作系统获救得到重组疫苗株，即区分免疫和感染A型流感病毒的H5亚型禽流感疫苗株；

所述突变的H5亚型HA基因能够将野生型HA蛋白中的氨基酸序列RERRRKRGLF突变为RETRGLF；

所述标签基因序列为编码B型流感病毒NA蛋白胞外区氨基酸序列的DNA序列；

或者，所述标签基因序列为B型流感病毒NA基因中编码胞外区氨基酸序列的DNA序列；

或者，所述标签基因序列为编码B型流感病毒NA蛋白的DNA序列；

或者，所述标签基因序列为B型流感病毒NA基因的DNA序列。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述标签基因序列两端还含有包装信号序列。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述标签基因序列的5′端包装信号序列为SEQ ID NO:3。

14.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述标签基因序列的3′端包装信号序列为SEQ ID NO:4。