[发明专利]区分免疫和感染动物H5亚型禽流感疫苗株及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了区分免疫和感染动物H5亚型禽流感疫苗株及其制备方法和应用，高致病H5亚型禽流感不仅给畜牧业带来巨大经济损失，而且严重威胁公共卫生学的安全。虽然常规的H5亚型禽流感全病毒灭活疫苗效果确实，价格低廉，应用面广等优点，但在血清学上无法区分免疫和感染动物，给禽流感的监测和净化带来巨大障碍。本发明用B型流感的NA作为标签，成功建立一种构建区分免疫和感染H5禽流感疫苗株的方法。该发明对H5亚型禽流感的防控和净化具有重要的应用价值和公共卫生学意义。

技术领域

本发明属于基因工程疫苗技术领域，涉及一种制备区分免疫和感染H5亚型禽流感疫苗株的方法及应用。

背景技术

禽流感病毒属于正黏病毒科，流感病毒属。流感病毒根据抗原性不同可分为A，B，C型，其中A型流感宿主广泛(包括禽类，人，猪等)致病力较强危害巨大。B型流感仅感染人和海豹，致病力相对较低。C型流感病毒，仅在人与猪中发现。A型和B型流感的基因组可以分为PB2,PB1,PA,NP,HA,NA,M，NS共8个基因片段。宿主被感染后，可以对HA，NA，M1和NP产生大量抗体。其中HA可以直接诱导主要中和抗体。以往的研究发现A型和B型病毒诱导的针对HA，NA，M1和NP的四种主要抗体在血清学上无交叉反应性。根据A型流感病毒粒子的表面囊膜蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶NA不同，将A型流感分为众多亚型(HnNn)。其中HA有18种亚型，NA有11种亚型，理论上可以产生198(18x11)种亚型，但是实际上自然界只存在少数优势亚型(如H5N1，H7N9，H9N2等)。不同亚型HA蛋白间序列同源性在40％-80％之间(Air GM.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States ofAmerica,1981,78(12):7639.Nobusawa E,et al.Virology,1991,182(2):475-485)。B型流感没有亚型之分，各个毒株基因相似性较高。根据HA的抗原性和基因型不同，B型流感病毒目前仅分为两个群，分别为Victoria群(依据B/Victoria/2/1987命名)和Yamagata群(依据B/Yamagata/16/1988命名)。禽类中几乎存在所有A型流感的各种亚型，在病毒的储存和进化中伴有重要作用。禽流感全球肆虐给养禽业带来巨大经济损失，随着禽流感病毒对人类的逐渐适应，禽流感感染人的事例也逐渐增多。相比季节性型人流感，禽流感感染人具有发病严重，死亡率高的特征，严重威胁公共卫生安全。在众多禽流感亚型中，H5危害及其严重，不仅造成巨大经济损失而且可以直接感染人。高致病性H5亚型禽流感可以在数天内导致家禽100％死亡，而且可以直接感染人。人感染后症状严重，死亡率高。禽流感在养殖场的彻底净化，是杜绝禽流感对食品安全和公共卫生风险的最有效方式。