[发明专利]一种单环刺螠抑菌活性物质的分离及活性测定方法

权利要求书

1.一种单环刺螠抑菌活性物质胆甾-4,6-二烯-3-醇和Hurgadacin的分离及活性测定方法，其特征在于，由以下步骤组成：

3种海洋源抑菌活性物质的提取和抑菌活性比较；

单环刺螠有机溶剂提取物的分离和抑菌活性测定：以A、B、C、D和E五种不同极性的溶剂对所述单环刺螠有机溶剂提取物进行萃取分离后，分别测定5种萃取物的抑菌活性，B和C萃取物的抑菌活性最强，所述A、B、C、D和E五种不同极性的溶剂分别为正己烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水；

单环刺螠B萃取物的硅胶柱色谱再分离和抑菌活性的测定：利用硅胶柱色谱对所述B萃取物进行分离，得到7种分离物B1～B7，分别测定B1～B7共7种分离物的抑菌活性，B3分离物的抑菌活性最强；

单环刺螠B3分离物的硅胶柱色谱再分离和抑菌活性的测定：利用硅胶柱色谱对所述B3分离物进行分离后，得到B3-1～B3-5共5种分离物，分别测定5种分离物的抑菌活性，B3-3分离物的抑菌活性最强；

单环刺螠B3-3分离物的硅胶柱色谱再分离和抑菌活性的测定：经硅胶柱色谱进一步分离所述B3-3分离物后得到B3-3-1、B3-3-2和B3-3-3分离物，分别测定3种分离物的抑菌活性，B3-3-2分离物的抑菌活性最强；

单环刺螠B3-3-2分离物的薄层色谱再分离和抑菌活性测定：将所述B3-3-2分离物经薄层色谱分离后，得到B3-3-2-1和B-3-3-2-2分离物，分别测定2种分离物的抑菌活性，B3-3-2-3分离物的抑菌活性最强；

单环刺螠B3-3-2-2分离物的Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离：利用Sephadex LH-20凝胶柱色谱对B3-3-2-2分离物进行纯化，最终得到白色粉末状固体，记为PS-3；

用于单环刺螠B萃取物的硅胶柱色谱再分离的洗脱剂为一定体积比的三氯甲烷-甲醇；

单环刺螠C萃取物的硅胶柱色谱再分离和抑菌活性的测定：利用硅胶柱色谱对所述C萃取物进行分离，得到10种分离物C1～C10，分别测定10种分离物的抑菌活性，C8分离物的抑菌活性最强；

单环刺螠C8分离物的硅胶柱色谱再分离和抑菌活性的测定：利用硅胶柱色谱对所述C8分离物进行分离后得到C8-1～C8-6共6种分离物，分别测定6种分离物的抑菌活性，C8-3分离物的抑菌活性最强；

单环刺螠C8-3分离物的硅胶柱色谱再分离和抑菌活性测定：所述C8-3分离物经硅胶柱色谱进一步分离后得到C8-3-1、C8-3-2和C8-3-3分离物，分别测定3种分离物的抑菌活性，C8-3-2分离物的抑菌活性最强；

单环刺螠C8-3-2分离物的凝胶柱色谱再分离和抑菌活性测定：利用凝胶柱色谱，以一定体积比的三氯甲烷和甲醇为洗脱剂，对所述C8-3-2分离物进行纯化后得到单体化合物PS-4；

用于单环刺螠C萃取物的硅胶柱色谱再分离的洗脱剂为一定体积比的石油醚-乙酸乙酯和三氯甲烷-甲醇；

单环刺螠中抑菌活性单体PS-3和单体化合物PS-4的结构解析；

所述PS-3为已知化合物胆甾-4,6-二烯-3-醇，PS-4为Hurgadacin。

2.根据权利要求1所述的一种单环刺螠抑菌活性物质胆甾-4,6-二烯-3-醇和Hurgadacin的分离及活性测定方法，其特征在于用于单环刺螠中抑菌活性测定的供试菌株为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、藤黄微球菌、巴氏杆菌、苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌和黄瓜枯萎病菌的一种或数种。