[发明专利]一种单环刺螠抑菌活性物质的分离及活性测定方法

说明书

本发明公开一种单环刺螠抑菌活性物的分离及活性测定方法。其特征在于，单环刺螠粗分离物抑菌活性测定；对单环刺螠中抑菌活性高的B萃取物中的分离物B3、B3‑3、B3‑3‑2和B3‑3‑2‑2进行抑菌活性测定；对单环刺螠中抑菌活性高的C萃取物中的分离物C8、C8‑3和C8‑3‑2的进行抑菌活性测定；所述方法分离得到抑菌活性优良的单体PS‑3和PS‑4，其中PS‑3为甾‑4,6‑二烯‑3‑醇，PS‑4为Hurgadacin。所述方法分离方法可靠，得到活性组分抑菌活性高，为单环刺螠中活性成分的提取分离提供依据。

技术领域

本发明属于海洋动物应用技术领域，更具体是涉及一种单环刺螠抑菌活性物质的分离及活性测定方法。

背景技术

海洋作为巨大的天然宝库，蕴含了丰富的生物资源。海洋生物体内存在着一些结构新颖、性质独特的化学物质。目前我国已经有6000多种海洋天然产物被发现，这些天然产物在医药、农药领域都具有很大的发展空间。本实验从单环刺螠中提取天然活性成分，并对其抑菌活性进行研究。

单环刺螠(Urchis unicinctus)俗称海肠子，为真体腔原口动物，在分类上隶属螠虫动物门(Echiuroidea)，螠纲(Echiurida)，无管螠目(Xenopneusta)，刺螠科(Urechidae)，刺螠属(Urechis)，是无管螠目在中国沿海分布的唯一种类。由于其分类地位独特，且能耐受高浓度硫化物，所以一直以来也是学术界研究的热点之一。

抑菌药物是现代医疗中不可或缺的一类药物，临床应用十分广泛。20世纪，抗生素的发现解决了医学界的重大难题。然而随着抗生素的广泛使用甚至滥用，导致细菌产生了耐药性。目前，大部分使用的抗生素来自陆栖放线菌和真菌，长期的开发使陆栖微生物资源日渐枯竭，因此从海洋生物中开发抑菌药物成为新的研究热潮。由于海洋动物生活在复杂的海洋环境中，其先天免疫系统进化的功能强大，能够产生或者分泌一系列抑菌的活性物质来进行自我保护。因此，海洋动物也称为筛选新型抑菌药物的重要资源库。

发明内容

为实现上述目的，本发明提供一种单环刺螠抑菌活性物质的分离及活性测定方法，其特征在于由以下步骤组成：

3种海洋源抑菌活性物质的提取和抑菌活性比较；

单环刺螠有机溶剂提取物的分离和抑菌活性测定；

单环刺螠B萃取物的再分离和抑菌活性的测定；

单环刺螠B3分离物的再分离和抑菌活性的测定；

单环刺螠B3-3组分的再分离和抑菌活性测定；

单环刺螠B3-3-2组分的再分离和抑菌活性测定；

单环刺螠B3-3-2-2组分的分离；

单环刺螠C萃取物的再分离和抑菌活性的测定；

单环刺螠C8分离物的再分离和抑菌活性的测定；

单环刺螠B8-3组分的再分离和抑菌活性测定；

单环刺螠C8-3-2组分的再分离和抑菌活性测定；

单环刺螠中抑菌活性单体PS-3和单体化合物PS-4的结构解析。

所述一种单环刺螠抑菌活性物质的分离及活性测定方法的萃取剂为正己烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水。

所述一种单环刺螠抑菌活性物质的分离及活性测定方法中用于单环刺螠中抑菌活性测试的供试菌株为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、藤黄微球菌、巴氏杆菌、苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌和黄瓜枯萎病菌的一种或数种。

所述一种单环刺螠抑菌活性物质的分离及活性测定方法中用于单环刺螠B萃取物的再分离的洗脱剂为一定体积比的三氯甲烷-甲醇。