[发明专利]基于硼亲和固相萃取的植物内源油菜素内酯的纯化方法

权利要求书

1.一种纯化内源油菜素内酯类化合物的方法，包括如下步骤：

1)向植物原料中加入提取溶剂和油菜素内酯化合物的同位素内标，混匀进行提取，去除残渣后，收集提取液进行如下处理a或b，得到结合物I；

所述处理a为将所述提取液上样于装填有非磁性硼亲和材料的固相萃取柱；

所述处理b为将所述提取液分散于非磁性硼亲和材料中；

或者，

向植物原料中加入提取溶剂、同位素内标和磁性硼亲和材料混匀后进行提取，得到结合物II；

所述植物原料中含有油菜素内酯类化合物；

2)将步骤1)所得结合物I或结合物II依次进行淋洗和氧化水解，去除氧化水解产物中的硼酸后，用有机溶剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，得到纯化产物；

所述步骤2)淋洗步骤中，淋洗溶剂为适用于反相与离子交换机理的洗脱溶剂；

所述步骤2)去除硼酸步骤为用水淋洗所述氧化水解步骤所得产物；

所述用有机溶剂进行洗脱步骤中，有机溶剂为反相洗脱溶剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，提取溶剂为甲醇水溶液或乙腈水溶液；

所述甲醇水溶液或乙腈水溶液的质量百分浓度具体为60％-100％；

所述植物原料的用量不超过100mg或不超过50mg或不超过10mg；

所述植物原料与提取溶剂的用量比为10mg：0.1-1mL；

所述植物原料与硼亲和材料的用量比为10mg：1-100mg；

所述非磁性硼亲和材料为表面含硼酸基团的聚合物基或硅胶基材料，粒径为50纳米至50微米级；

所述磁性硼亲和材料为超顺磁性的表面含硼酸基团的聚合物基或硅胶基材料；粒径为50纳米至5微米级。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述淋洗溶剂选自水、甲醇、乙腈、甲酸水溶液、质量百分浓度为0.1-10％的甲酸水溶液、甲酸的甲醇溶液、质量百分浓度为0.1-10％的甲酸的甲醇溶液、甲酸的乙腈溶液或质量百分浓度为0.1-10％的甲酸的乙腈溶液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)氧化水解为一步完成或先氧化后水解；

所述氧化水解为一步完成时，所用试剂为含有过氧化氢的氨水溶液；其中，过氧化氢含量为5-30％；氨含量为5-25％；

所述氧化水解为先氧化后水解时，所用氧化试剂为过氧化氢的水溶液；所述过氧化氢的水溶液中，过氧化氢的质量百分浓度为5-30％；

所用水解试剂为氨水溶液；所述氨水溶液中，氨含量为5-25％。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述反相洗脱溶剂选自80-100wt％的甲醇水溶液或80-100wt％的乙腈水溶液。

6.权利要求1-5中任一所述方法在油菜素内酯类化合物的定量分析中的应用。

7.一种定量分析内源油菜素内酯类化合物的方法，包括如下步骤：

将权利要求1-5中任一方法所得纯化产物溶于溶剂中，再加入衍生化试剂进行硼酸基团与醇羟基的成酯反应，将所得衍生化产物进行LC-MS/MS检测。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述溶剂选自乙腈、甲醇和四氢呋喃中的至少一种；

所述衍生化试剂为含有胺基或者季胺基的有机硼酸类化合物、6-甲氧基-3-吡啶硼酸、3-(二甲氨基)-苯硼酸、4-(二甲氨基)-苯硼酸或2-溴吡啶-5-硼酸；

所述衍生化步骤中，温度为10-60℃；时间为0.1-2h。