[发明专利]一种使用来源于甘油醛-3-磷酸脱氢酶蛋白的特征多肽鉴别美国肉参的方法

权利要求书

1.一种检测美国肉参的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)对待测样本进行质谱前处理，获得待测样本的多肽滤液；

(2)通过质谱法检验待测样本的多肽滤液成分，分析待测样本中的美国肉参成分；

所述的分析待测样本中的美国肉参成分为，将待测样本的质谱结果对比SEQ ID NO.5～6所示的各条特异性多肽的质谱谱图，出现与SEQ ID NO.5～6所示的各条特异性多肽的质谱检测谱图相同的谱图时，即可判断该待测样本为美国肉参样本；

SEQ ID NO.5：AGIALSENFVK；

SEQ ID NO.6：VPVPDVSVVDLTLR。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的质谱前处理步骤如下：

(1)称取海参样品均质成粉末状态，加入蛋白提取液，震荡提取蛋白，高速低温离心，取上清液转移到EP管中，所述蛋白提取液为8M尿素、50mM NH₄HCO₃的溶液；

(2)取DTT加入到上述蛋白溶液中，37℃反应1小时；

(3)取现配的IAA加入到已经冷却至室温的上述反应液中，室温避光反应1小时；

(4)采用10K滤膜超滤30分钟，使用碳酸氢铵溶液反复冲洗滤膜上层，转移至新的EP管中；

(5)再加入碳酸氢铵溶液重复此步骤，合并溶液完成膜下蛋白提取；

(6)取Trypsin酶溶液加入到上述蛋白溶液，37℃酶解16-18小时；

(7)采用10K滤膜超滤20分钟，收集下层的肽段滤液，待上机检测。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的质谱法检测为：

采用AB SCIEX5600检测，

流动相A：0.1％甲酸-乙腈，流动相B：0.1％甲酸-水，

流速：0.25mL/min，

TOF扫描范围：350-1500Da，

正离子反应模式，GS1：35，GS2：45，Curtain Gas：35，ISVF：5500，TEM：500，DP：100，CE：10。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的质谱法检测为：

采用AB SCIEX三重四级杆检测，

流动相A：0.1％甲酸-乙腈，流动相B：0.1％甲酸-水，

流速：0.3mL/min，

电喷雾离子源，正离子反应模式，检测方式：MRM，喷雾电压：5500V，离子传输管温度：475℃；鞘气压力：40；辅助气压力：6。

5.一组特征多肽在制备用于鉴别美国肉参的试剂或试剂盒产品中的应用；所述的特征多肽是来源于甘油醛-3-磷酸脱氢酶蛋白的特征多肽，其序列为：

SEQ ID NO.5：AGIALSENFVK；

SEQ ID NO.6：VPVPDVSVVDLTLR；

所述的SEQ ID NO.5～6的多肽片段的m/z依次分别为：574.8；754.9。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述的特征多肽与选自以下各组的特征多肽共同应用于所述用于鉴别美国肉参的试剂或试剂盒产品，

(1)序列如SEQ ID NO.1-3所示的特征多肽：

SEQ ID NO.1：EIAALAPPTMK；

SEQ ID NO.2：LCYVFLDFEQEMATAASSSSLEK；

SEQ ID NO.3：CDETLFQPSFIGMESAGIHETTYNSIMK；

(2)序列如SEQ ID NO.11-12所示的特征多肽：

SEQ ID NO.11：IGSVFESLNR；

SEQ ID NO.12：PVVFLNPER；

(3)序列如SEQ ID NO.19-23所示的特征多肽：

SEQ ID NO.19：MSELESQVTSSK；

SEQ ID NO.20：MSELESQVMGSK；

SEQ ID NO.21：QLESELDDTSEK；

SEQ ID NO.22：YDDIEQSSEESER；

SEQ ID NO.23：YNDIEQSSEESER。