[发明专利]胶原纤维马松三色染色试剂盒及其制备方法和染色方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种胶原纤维马松三色染色试剂盒及其制备方法和染色方法。

背景技术

随着病理学的快速发展，病理组织染色成为该领域关键技术之一，特别是基于组织基本结构的伊红-苏木素染色法，不仅可直观反映组织内部细胞质和细胞核的变化，而且可通过细胞和细胞核的变化判定组织细胞的病变状态。然而，由于细胞结果的复杂性，组织内容还存在多种特殊结构，如胶原纤维、网状纤维、弹力纤维、肌肉组织、脂肪、糖原、粘液、病理性沉淀(如铜、含铁血黄素等)、核酸等，如何快速界定组织细胞内特殊结构成分的变化成为该领域亟待解决的问题。因此，组织细胞特殊染色技术得到了快速发展，通过该技术可确定组织细胞内正常结构和病理变化过程中出现的异常物质、病变及病原体等，更有利于直观展示组织细胞的病理学变化。

胶原纤维是一类分布最广泛、含量最多的，且主要含有胶原蛋白和氨基酸(如甘氨酸、脯氨和羟脯氨酸等)的纤维组合物，广泛分布于各脏器内，在皮肤、巩膜和肌腱最为丰富。为了明确胶原纤维的病理变化，常用Van Gieson、Masson和Mallary等特殊染色方法，淡绿可将其染成绿色，苯胺蓝可将其染成蓝色。然而，鉴于上述方法染色试剂的多样性和染色方法的复杂性，使得该染色过程比较繁琐复杂，从而限制了其在临床上的大规模应用。目前市场上商业化的成套染色产品几乎没有，部分企业开发的试剂多为上述染色方法中的部分大规格试剂，如250ml和500ml包装，染色过程依赖染缸等设备，导致染色工序操作复杂、成本高，从而限制了其广泛应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种胶原纤维马松三色染色试剂盒及其制备方法和染色方法，用以解决现有技术中依赖染缸染色导致操作复杂、成本高等问题。

本发明提供了一种胶原纤维马松三色染色试剂盒，包括盒体，盒体内包括6个滴瓶，6个滴瓶内分别装有不同试剂，滴瓶的容量为5ml或10ml。

进一步的，6个滴瓶中的试剂分别为苏木素染色液，盐酸分化液，返蓝液，丽春红酸性品红液，磷钼酸液和苯胺蓝液。

本发明的另一方面提供了一种胶原纤维马松三色染色试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

1)试剂配制

a、苏木素染色液：称取定量的苏木精溶解于无水乙醇中，得溶液A，称取定量的硫酸铝溶于蒸馏水中，得溶液B，将溶液A和溶液B混合后加入碘酸钠和冰醋酸溶解，最后经滤膜过滤；

b、盐酸分化液：量取定量的盐酸加入乙醇中混匀；

c、返蓝液：称取定量的碳酸锂溶解于蒸馏水，混匀后经滤膜过滤；

d、丽春红酸性品红液：称取定量的丽春红和酸性品红，加入蒸馏水中，混匀后加入乙酸，最后经滤膜过滤；

e、磷钼酸液：称取定量的磷钼酸溶解于蒸馏水，混匀后经滤膜过滤；

f、苯胺蓝液：称取定量的苯胺蓝溶解于蒸馏水，加入乙酸，混匀后经滤膜过滤；

2)试剂分装

分别将步骤1)所得苏木素染色液、盐酸分化液、返蓝液、丽春红酸性品红液、磷钼酸液和苯胺蓝液按试剂盒规格分装在滴瓶中，最后将装有6种试剂的滴瓶放置于试剂盒的盒体中。

进一步的，滤膜的孔径为0.45μm。

本发明的另一方面提供一种基于胶原纤维马松三色染色试剂盒的染色方法，包括如下步骤：

1)在组织切片上滴加1-2滴苏木素染色液，染色5-10min，水洗2-3min；

2)在步骤1)所得产物上滴加1-2滴盐酸分化液，分化2-3秒，水洗2-3min；

3)在步骤2)所得产物上滴加1-2返蓝液，返蓝6-10秒，水洗2-3min；

4)在步骤3)所得产物上滴加1-2滴丽春红酸性品红液，染色5-8min，水洗1-2min；

5)在步骤4)所得产物上滴加1-2滴磷钼酸液，染色1-3min，水洗2-3min；

6)在步骤5)所得产物上滴加1-2滴苯胺蓝液，孵育5min，水洗2-3min；

7)将步骤6)所得产物置于60℃温箱中烘干，透明、封片。

采用上述本发明技术方案的有益效果是：

本发明从试剂盒的包装、试剂的配方及染色过程进行优化，进而组装成一套基于滴注法的胶原纤维马松三色染色试剂盒，可直接用于小规模组织切片的快速染色，具体为：

采用滴瓶进行试剂包装，不仅节约了染色试剂，而且打破了传统大包装的染缸染色壁垒，具有经济、实用、特效、快速等特点；