[发明专利]检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的复合荧光PCR检测用引物及探针、试剂盒

权利要求书

1.一种同时检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的复合荧光PCR检测用引物以及探针，其特征在于，包括：

用于扩增空肠弯曲菌的上游引物mapA-F，所述上游引物mapA-F针对空肠弯曲菌的mapA基因设计；

用于扩增空肠弯曲菌的下游引物mapA-R，所述下游引物mapA-R针对空肠弯曲菌的mapA基因设计；

用于检测空肠弯曲菌的探针probe-1，所述探针probe-1针对空肠弯曲菌的mapA基因设计，所述探针probe-1的两端分别结合有第一荧光报告基团和第一荧光淬灭基团；

用于扩增沙门氏菌的上游引物fimY-F，所述上游引物fimY-F针对沙门氏菌的fimY基因设计；

用于扩增沙门氏菌的下游引物fimY-R，所述下游引物fimY-R针对沙门氏菌的fimY基因设计；

用于检测沙门氏菌的探针probe-2，所述探针probe-2针对沙门氏菌的fimY基因设计，所述探针probe-2的两端分别结合有第二荧光报告基团和第二荧光淬灭基团；

用于扩增单增李斯特菌的上游引物hly-F，所述上游引物hly-F针对单增李斯特菌的hly基因设计；

用于扩增单增李斯特菌的下游引物hly-R，所述下游引物hly-R针对单增李斯特菌的hly基因设计；

用于检测单增李斯特菌的探针probe-3，所述探针probe-3针对单增李斯特菌的hly基因设计，所述探针probe-3的两端分别结合有第三荧光报告基团和第三荧光淬灭基团；

所述第一荧光报告基团、所述第二荧光报告基团以及所述第三荧光报告基团各不相同。

2.根据权利要求1所述的同时检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的复合荧光PCR检测用引物以及探针，其特征在于，所述上游引物mapA-F的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物mapA-R的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述上游引物fimY-F的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述下游引物fimY-R的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；

所述上游引物hly-F的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，所述下游引物hly-R的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。

3.根据权利要求1所述的同时检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的复合荧光PCR检测用引物以及探针，其特征在于，所述探针probe-1的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

所述探针probe-2的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；

所述探针probe-3的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示。

4.根据权利要求1所述的同时检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的复合荧光PCR检测用引物以及探针，其特征在于，所述第一荧光报告基团、所述第二荧光报告基团和所述第三荧光报告基团均选自FAM荧光基团、JOE荧光基团、cy5荧光基团、ROX荧光基团、VIC荧光基团和TET荧光基团中的一种；

所述第一荧光淬灭基团、所述第二荧光淬灭基团和所述第三荧光淬灭基团均选自Tamara淬灭基团、BHQ20淬灭基团和Dabcy1淬灭基团中的一种。

5.根据权利要求1或4所述的同时检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的复合荧光PCR检测用引物以及探针，其特征在于，所述第一荧光报告基团为FAM荧光基团，所述第二荧光报告基团为JOE荧光基团，所述第三荧光报告基团为cy5荧光基团。

6.一种同时检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的荧光PCR检测用试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括如权利要求1～5任一项所述的复合荧光PCR检测用引物以及探针。

7.根据权利要求6所述的同时检测空肠弯曲菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的荧光PCR检测用试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括PCR缓冲液、dNTP、直扩PCR聚合酶、阳性对照品以及阴性对照品。