[发明专利]试剂在制备药物中的用途、筛选药物的方法以及药物组合物

说明书

本发明提出了试剂在制备药物中的用途，该试剂用于抑制microRNA‑708，该药物用于下列的至少之一：降低细胞内甘油三脂的含量，抑制脂肪细胞的分化，抵御肥胖，促进胰岛素的敏感性，提高呼吸代谢速率，提高能量消耗量，提高线粒体数量，上调氧化磷酸化或产热相关基因，缓解胰岛素抵抗，抵御脂肪肝，治疗或预防II型糖尿病。发明人发现，利用抑制microRNA‑708的试剂所制备的药物可有效用于降低细胞内甘油三脂的含量，抑制脂肪细胞的分化，抵御肥胖，促进胰岛素的敏感性，提高呼吸代谢速率，提高能量消耗量，提高线粒体数量，上调氧化磷酸化或产热相关基因，缓解胰岛素抵抗，治疗或预防II型糖尿病。

技术领域

本发明涉及生物领域，具体地，本发明涉及试剂在制备药物中的用途、筛选药物的方法以及药物组合物。

背景技术

MicroRNA(miRNA)是一类内生的、长度约为20-24个核苷酸的小RNA，其在细胞内具有多种重要的调节作用。每个miRNA可以有多个靶基因，而几个miRNA也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达，也可以通过几个miRNA的组合来精细调控某个基因的表达。据推测，miRNA调节着人类三分之一的基因。最近的研究表明大约70％的哺乳动物miRNA是位于TUs区(transcriptionunits,TUs)(Rodriguez et al,2004)，且其中大部分是位于内含子区(KimNam,2006)。一些内含子miRNA的位置在不同的物种中是高度保守的。miRNA不仅在基因位置上保守,序列上也呈现出高度的同源性(Pasquinelli etal，2000；Ruvkun et al，2001；LeeAmbros，2001)。miRNA高度的保守性与其功能的重要性有着密切的关系。miRNA与其靶基因的进化有着密切的联系,研究其进化历史有助于进一步了解其作用机制和功能。

microRNA在调控生命活动的多个方面起着至关重要的调控作用。但microRNA与肥胖以及糖尿病的关系还有待科学家进一步地探索和发现。

发明内容

本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：

发明人利用了实验室已有的两种小鼠模型：即ob(瘦素基因敲除)小鼠和ob/fsp27-/-(leptin和fsp27基因同时敲除)小鼠，这两种小鼠分别表现为肥胖和瘦的两种表型，发明人将这两种小鼠的腹腔内脂肪分离出来，然后提取RNA，进行miRNAmicroarray和统计学分析、realtime PCR以及功能验证，发现microRNA-708能显著地提高细胞内甘油三酯的含量。

为此，在本发明的第一方面，本发明提出了试剂在制备药物中的用途，所述试剂用于抑制microRNA-708，所述药物用于下列的至少之一：降低细胞内甘油三脂的含量，抑制脂肪细胞的分化，抵御肥胖，促进胰岛素的敏感性，提高呼吸代谢速率，提高能量消耗量，提高线粒体数量，上调氧化磷酸化或产热相关基因，缓解胰岛素抵抗，治疗或预防II型糖尿病。发明人发现，利用抑制microRNA-708的试剂所制备的药物可有效用于降低细胞内甘油三脂的含量，抑制脂肪细胞的分化，抵御肥胖，促进胰岛素的敏感性，提高呼吸代谢速率，提高能量消耗量，提高线粒体数量，上调氧化磷酸化或产热相关基因，缓解胰岛素抵抗，治疗或预防II型糖尿病，抵御脂肪肝。

根据本发明的实施例，上述用途还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，所述抑制是通过shRNA，反义核酸，核酶，显性负突变，CRISPR-Cas9，CRISPR-Cpf1和锌指核酸酶至少之一实现的。进而有效实现敲除或敲低microRNA-708或抑制microRNA-708的功能。

根据本发明的实施例，所述抑制是通过shRNA实现的，所述试剂包含第一核酸，所述第一核酸具有SEQ ID NO：1。

AAGGAGCUUACAAUCUAGCUGGG(SEQ ID NO：1)。