[发明专利]一种用于区分丝瓜品种的RAPD引物及其应用

权利要求书

1.一种用于区分丝瓜品种的RAPD引物，其特征在于，包括如下引物：

RP487：5’-AGTCAGCCACG-3’；

RP559：5’-TCTGTGCTGGA-3’；

RP1012：5’-GGCACTGAGGC-3’；

RP1046：5’-GTCGGAGGTGG-3’；

所述的丝瓜品种包括：长香玉，绿领2号，蛇形丝瓜，绿王子，绿油1号，五叶香，香妃206，改良长沙肉丝瓜，香长丝瓜，方震AB321，长香丝瓜，绿帅，赛佳丽，碧玉，中绿，春香白丝瓜，湘优一号，香玉白，铁八棱，早玉2号。

2.权利要求1所述的用于区分丝瓜品种的RAPD引物在区分丝瓜品种中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特证在于，包括如下步骤：

(1) 提取丝瓜叶片基因组DNA；

(2) 利用RP487引物对步骤(1)得到的基因组DNA进行RAPD扩增，得到的PCR产物用琼脂糖凝胶电泳检测，若在1000bp、100bp处都出现特征性谱带，而在2000bp无特征性谱带，丝瓜的品种为“五叶香”；若在1000bp、500bp、100bp处都出现特征性谱带，丝瓜品种为“长香玉”；若在2000bp处出现特征性谱带，而在1000bp、100bp处都未出现特征谱带，则丝瓜品种为“湘优一号”；

(3) 若琼脂糖凝胶电泳检测结果与步骤(2)不符，则利用RP559引物再对基因组DNA进行RAPD扩增，

若利用RP487引物扩增时，在1000bp处出现特征性谱带，而在2000bp、100bp处都未出现特征性谱带，RP559引物扩增后使用如下方法判断丝瓜品种：若利用RP559引物扩增时，在1000bp、500bp、200bp处都出现特征性谱带，其品种为“赛佳丽”；在200bp处出现特征性谱带，而在1000bp、500bp处都未出现特征性谱带，其品种为“绿王子”；若在1000bp、200bp都出现特征谱带而在500bp未出现特征性谱带的，其品种为“绿油1号”；若在1000bp出现特征性谱带，而在500bp、200bp都未出现特征谱带，则进入步骤(4)；若在1000bp、400bp均出现特征性谱带，则进入步骤(5)；

若利用RP487引物扩增时，在100bp处出现特征性谱带，而在2000bp、1000bp处都未出现特征性谱带，利用引物RP559扩增后使用如下方法判断丝瓜品种：经琼脂糖凝胶电泳检测在2000bp、500bp处均出现特征性谱带，其品种为“春香白丝瓜”；若在2000bp、1000bp都出现特征性谱带，而500bp处未出现特征性谱带，其品种为“香玉白”；若在1000bp、500bp出现特征性谱带，而2000bp处未出现特征性谱带，其品种为“蛇形丝瓜”；若在1000bp出现特征性谱带，而2000bp、500bp都未出现特征性谱带，则进入步骤(6)；

(4) 利用RP559引物进行RAPD扩增，若在1000bp出现特征性谱带，而在500bp、200bp都未出现特征谱带， RP1012引物扩增后使用如下方法判断丝瓜品种：

若在2000bp、500bp处都出现特征性谱带，其品种为“香妃206”；若在2000bp、750bp处都出现特征性谱带的，其品种为“香长丝瓜”；若在750bp出现特征性谱带的，则进入步骤(7)；

(5) 利用RP559引物进行RAPD扩增，若在1000bp、400bp处都出现特征性谱带， RP1012引物进行RAPD扩增后使用如下方法判断丝瓜品种：

若在1000bp与250bp处均出现特征性谱带的，其品种为“绿领2号”；若在1000bp处未出现特征谱带，而在250bp处出现特征性谱带，则进入步骤(8)；

(6) 利用RP559引物进行RAPD扩增，若在1000bp出现特征性谱带，而2000bp、500bp都未出现特征性谱带，再用RP1012引物进行RAPD扩增后使用如下方法判断丝瓜品种：

若在1000bp、500bp、250bp处都出现特征性谱带的，其品种为“绿帅”；在1000bp、500bp处都出现特征性谱带，而在250bp未出现特征性谱带的，其品种为“铁八棱”；若在1000bp出现特征性谱带，500bp、250bp都未出现特征性谱带，则进入步骤(9)；

(7) 利用RP1012引物进行RAPD扩增，若在750bp出现特征谱带，RP1046引物进行RAPD扩增后使用如下方法判断丝瓜品种：

若在800bp和500bp都出现特征性谱带的，其品种为“方震AB321”；若在800bp处出现特征性谱带，而在500bp未出现特征性谱带，其品种为“中绿”；

(8) 利用RP1012引物进行RAPD扩增，若在1000bp处未出现特征谱带，而在250bp处出现特征性谱带，RP1046引物进行RAPD扩增后使用如下方法判断丝瓜品种：

若在1000bp、400bp均出现特征性谱带的为品种“改良长沙肉丝瓜”；若在1000bp处出现特征谱带、400bp处未出现特征谱带的为品种“碧玉”；

(9) 利用RP1012引物进行RAPD扩增，若在1000bp处出现特征谱带，而在500bp、250bp处未出现特征性谱带，RP1046引物进行RAPD扩增后使用如下方法判断丝瓜品种：

若在1000bp出现特征性谱带的为品种“长香丝瓜”；若在1000bp未出现特征谱带的为品种“早玉2号”。