[发明专利]一种用于区分丝瓜品种的RAPD引物及其应用

说明书

本发明公开了一种用于区分丝瓜品种的RAPD引物，属于分子生物学分子标记领域。该方法通过设计筛选出的4个RAPD随机引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1～4所示，用于扩增未知丝瓜品种的DNA，通过统计凝胶电泳后的谱带，区分出具有唯一特异性谱带的品种，并建立被区分品种的树形鉴别图。本发明的引物提高了RAPD反应的稳定性，操作简便，高效准确，节省引物，仅通过4次PCR就可轻松的将“长香玉”等20个丝瓜品种在分子水平上进行快速区分，所得到的品种鉴定图比聚类树更具有直观性，即根据品种鉴定图就可以快速找出能区分任意两个品种的引物，该方法可以实现丝瓜种苗早期鉴定，在其他物种上也具有广泛的通用性。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种利用RAPD分子标记技术快速区分丝瓜品种的方法。

背景技术

丝瓜为起源于中国的一种世界性蔬菜，其栽培历史悠久，品种资源及其丰富，2006年以来全国年播种面积超过1200千公顷，位于所有蔬菜作物的前3位，在蔬菜生产与供应中占有重要地位。近些年来，随着我国丝瓜产量及栽培面积的大幅度扩展，越来越多的优良品种应用于丝瓜生产中。因此，建立丝瓜品种快速可靠的鉴定技术体系对于丝瓜品种遗传资源的研究保护、苗期鉴定、品种区分乃至丝瓜产业的持续发展等具有重要的意义。

DNA分子标记是随着分子克隆和重组DNA等生物技术迅速发展而产生的一类遗传标记，由于其直接建立在分子水平上，而不受外界环境、作物发育阶段、取样部位等因素影响，其检出的多态性位点是无限的，故鉴定结果具有高度的可靠性，且重复性高，鉴别力强。

由于目前传统单一的形态学品种鉴定方法已无法满足有效鉴别或区分当今日益增多的品种的要求。分子标记的应用给作物遗传育种研究带来了巨大变化，同时也应用到了品种鉴定的研究中。在常用的RAPD、ISSR、SRAP和AFLP等众多分子标记技术中，随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)基于PCR技术，是应用较早的分子标记技术之一，它以分析程序简便快捷，周期性短，不易受外界环境影响，所需费用低，且无需对基因组序列进行预知等优点，已被普遍应用于指纹图谱构建、种质资源的遗传基础研究、基因的快速定位、基因连锁标记、遗传多样性分析，品种分类研究等方面。

现有的利用RAPD技术在进行蔬菜作物品种区分与种质鉴定的研究工作中，多采用计算机软件绘制数字化指纹图谱并结合统计学软件聚类分析得出聚类树，但是此聚类分析结果不但无法直观显示出区分品种的引物，无法显示鉴别过程，其操作量大，缺乏实用性。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是：提供一种利用RAPD技术区分丝瓜品种的引物。

本发明还要解决的技术问题是：提供利用上述引物区分丝瓜品种的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种用于区分丝瓜品种的RAPD引物，包括如下引物：

RP487：5’-AGTCAGCCACG-3’；

RP559：5’-TCTGTGCTGGA-3’；

RP1012：5’-GGCACTGAGGC-3’；

RP1046：5’-GTCGGAGGTGG-3’。

上述用于区分丝瓜品种的RAPD引物在区分丝瓜品种中的应用在本发明的保护范围之内。

其中，所述的丝瓜品种包括：长香玉，绿领2号，蛇形丝瓜，绿王子，绿油1号，五叶香，香妃206，改良长沙肉丝瓜，香长丝瓜，方震AB321，长香丝瓜，绿帅，赛佳丽，碧玉，中绿，春香白丝瓜，湘优一号，香玉白，铁八棱，早玉2号。

利用上述区分丝瓜品种的RAPD引物区分丝瓜品种的具体方法如下，包括如下步骤：