[发明专利]一种药物组合物及其应用

权利要求书

1.一种药物组合物在制备增加骨量的药物中的用途，其特征在于，所述药物组合物包括携带化学遗传基因的腺相关病毒和激活化学遗传基因的药物；所述化学遗传基因为hM4Di；所述激活化学遗传基因的药物为叠氮平-N-氧化物溶液。

2.一种用于非治疗目的的增加骨量的方法，其特征在于，采用如权利要求1所述的药物组合物，具体包括如下步骤：

(1)构建携带化学遗传基因的腺相关病毒；

(2)将步骤(1)得到的腺相关病毒感染TH神经元细胞，进行验证并标记胞体位置；

(3)将步骤(1)得到的腺相关病毒感染小鼠骨髓，再在腹腔注射叠氮平-N-氧化物溶液。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述腺相关病毒的构建方法如下：

(1’)构建质粒：将化学遗传基因、红色荧光基因和神经细胞特异性启动子构建在pAAV质粒上，得到pAAV-syn DIO-hM4Di-mCherry；

(2’)转染细胞：将步骤(1’)得到的质粒与腺相关病毒的病毒包装质粒pHelper和pAAV-RC9共转293FT细胞；

(3’)收获病毒：转染后20-30h换液，换液后12-20h进行超速离心破膜，将破膜后悬液通过20％的蔗糖滤柱，收集上清，得到所述腺相关病毒。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3’)所述转染的时间为24h。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3’)所述换液后16h进行超速离心破膜。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2’)所述共转的转染试剂浓度为每200000个细胞用5-8mg/L的脂质体。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2’)所述共转的转染试剂浓度为每200000个细胞用6mg/L的脂质体。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3’)所述离心的转速为4000-6000g。

9.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3’)所述离心的转速为5000g。

10.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3’)所述换液后的培养液为含有丙酮酸钠的DMEM。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述丙酮酸钠的浓度为4-8mM。

12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述丙酮酸钠的浓度为5mM。

13.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，还包括计算所述腺相关病毒的滴度的步骤。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述腺相关病毒滴度为(1-3)×10¹²TU/mL。

15.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述腺相关病毒滴度为1×10¹²TU/mL。

16.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述腺相关病毒的感染浓度为细胞个数：病毒个数＝1:(400-600)。

17.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述腺相关病毒的感染浓度为细胞个数：病毒个数＝1:500。

18.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述神经元细胞为TH-cre转基因小鼠骨髓内TH神经元细胞。