[发明专利]具有灵敏荧光各向异性响应的免疫球蛋白E的荧光染料标记核酸适配体有效
申请号: | 201711212201.8 | 申请日: | 2017-11-28 |
公开(公告)号: | CN107868787B | 公开(公告)日: | 2021-05-11 |
发明(设计)人: | 赵强;白云龙 | 申请(专利权)人: | 中国科学院生态环境研究中心 |
主分类号: | C12N15/115 | 分类号: | C12N15/115;G01N33/68;G01N33/58 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅 |
地址: | 100085*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 具有 灵敏 荧光 各向异性 响应 免疫球蛋白 染料 标记 核酸 适配体 | ||
1.用于检测人免疫球蛋白E的核酸适配体,为如下(a1)-(a13)中任一种:
(a1)将核酸适配体IgE37第10位所示的碱基T进行FAM标记得到的适配体;
(a2)将核酸适配体IgE37第11位所示的碱基T进行FAM标记得到的适配体;
(a3)将核酸适配体IgE37第13位所示的碱基T进行FAM标记得到的适配体;
(a4)将核酸适配体IgE37第10位所示的碱基T进行TMR标记得到的适配体;
(a5)将核酸适配体IgE37第9位所示的碱基T进行FAM标记得到的适配体;
(a6)将核酸适配体IgE37第15位所示的碱基C进行FAM标记得到的适配体;
(a7)将核酸适配体IgE37第17位所示的碱基T进行FAM标记得到的适配体;
(a8)将核酸适配体IgE37第23位所示的碱基C进行FAM标记得到的适配体;
(a9)将核酸适配体IgE37第30位所示的碱基C进行FAM标记得到的适配体;
(a10)将核酸适配体IgE37第5位所示的碱基C进行TMR标记得到的适配体;
(a11)将核酸适配体IgE37第11位所示的碱基T进行TMR标记得到的适配体;
(a12)将核酸适配体IgE37第17位所示的碱基T进行TMR标记得到的适配体;
(a13)将核酸适配体IgE37第22位所示的碱基C进行TMR标记得到的适配体;
所述核酸适配体IgE37的核苷酸序列如序列1所示。
2.用于检测人免疫球蛋白E的试剂盒,该试剂盒包括权利要求1所述的核酸适配体。
3.权利要求1所述的核酸适配体或权利要求2所述的试剂盒在如下(c1)-(c3)中任一种中的应用:
(c1)制备识别或结合人免疫球蛋白E的产品;
(c2)制备检测或辅助检测人免疫球蛋白E的产品;
(c3)制备诊断和/或治疗与人免疫球蛋白E相关的疾病的产品。
4.一种检测或辅助检测人免疫球蛋白E的方法,包括如下步骤:
(d1)将权利要求1所述的核酸适配体和待测样品在结合缓冲液中混匀,得到混合溶液;
(d2)将所述混合溶液进行温育;温育结束后,检测荧光各向异性值或荧光偏振值,从而实现对所述待测溶液中人免疫球蛋白E的检测;
所述方法为非疾病诊断和治疗目的。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:所述对所述待测溶液中人免疫球蛋白E的检测为定量检测或定性检测;
若为定量检测时,按照如下确定所述待测溶液中人免疫球蛋白E的含量:当所述温育结束后,将所测定的荧光各向异性值或荧光偏振值代入标准曲线方程,从而计算所述待测溶液中人免疫球蛋白E的含量;所述标准曲线方程按照如下获得:用系列已知浓度的人免疫球蛋白E标准品溶液替代所述待测溶液进行步骤(d1)-(d2),测得各浓度的人免疫球蛋白E标准品溶液对应的荧光各向异性值或荧光偏振值,从而获得人免疫球蛋白E的浓度与荧光各向异性值或荧光偏振值之间的标准曲线方程;
若为定性检测时,按照如下确定所述待测溶液中是否含有人免疫球蛋白E:当所述温育结束后,若所测定的荧光各向异性值或荧光偏振值显著高于对照值,则所述待测溶液中含有或候选含有人免疫球蛋白E;反之,则所述待测溶液中不含有或候选不含有人免疫球蛋白E;
所述对照值为用不含有人免疫球蛋白E的溶液替代所述待测溶液进行步骤(d1)-(d2)所测得的荧光各向异性值或荧光偏振值。
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