[发明专利]磁微粒化学发光法测定rT3含量的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种磁微粒化学发光法测定人血清中rT3含量的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括生物素化rT3抗原衍生物、抗体酶标试剂、酶标rT3抗原衍生物、生物素化rT3兔多抗和校准品；

所述试剂盒中主要组分按照如下制备方法制得：

一、rT3抗原衍生物制备过程:

1)、分别配置pH＝5.0的0.05M的MES缓冲液和PH＝9.0的0.1M的NaHCO3缓冲液；

2)、将rT3用MES缓冲液溶解，得到浓度为5mg/ml的rT3溶液；

3)、将EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)用0.05M的MES缓冲液溶解，得到浓度为10mg/ml的EDC缓冲液；

4)、配制终浓度为5mg/ml的PH＝10.0的乙二胺二盐酸盐溶液；

5)、将5mg/ml的rT3溶液加入EDC缓冲液300ul，室温反应3h；

6)、取0.1ml乙二胺二盐酸盐溶液加入到步骤5)中的反应完成后的体系中，并混匀，室温反应1h；

7)、用截留分子量为500的透析袋透析步骤6)中的反应产物，透析缓冲液为PH＝9.0的0.1M的NaHCO3缓冲液；透析后产物收集备用；

二、生物素化rT3抗原衍生物制备过程:

将生物素-NHS用DMSO进行溶解后，按照rT3抗原衍生物与生物素-NHS摩尔比为1:18～22加入步骤一所得的rT3抗原衍生物，充分混匀后室温反应2h；用透析袋透析反应产物，将透析液稀释至工作液浓度；

三、抗体酶标试剂制备过程：

将rT3兔多抗体和碱性磷酸酶分别活化后，将二者混合2-8℃反应14～20h小时；将反应物用层析柱进行纯化，收集I峰II峰进行混合后用缓冲液将配置成工作液浓度；

四、酶标rT3抗原衍生物制备过程：

将rT3抗原衍生物和碱性磷酸酶分别活化后，将二者混合2-8℃反应14～20h小时；将反应物用层析柱进行纯化，收集I峰II峰进行混合后用缓冲液将配置成工作液浓度；

五、生物素化rT3兔多抗制备过程：

1)将生物素-NHS，用DMSO进行溶解得到DMSO溶解的生物素，加入rT3兔多抗，充分混匀后室温反应2h；透析后将透析液稀释至工作液浓度。

2.如权利要求1所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤三中rT3兔多抗体用0.1*的PBS进行透析，然后用2IT进行活化，得到活化后的抗体；所述步骤四中rT3抗原衍生物采用0.1*的PBS进行透析，然后用2IT进行活化，得到活化后的抗体。

3.如权利要求1或2所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤三和四中的碱性磷酸酶用SMCC进行活化，得到活化后的碱性磷酸酶。

4.如权利要求3所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述校准品的制备方法为：

向0.05M的PH＝7.4的PBS缓冲液中加入5％的BSA和0.1％防腐剂，制得校准品缓冲液；然后将rT3抗原用校准品缓冲液进行稀释，依次为：2000pg/mL、1000pg/mL、500pg/mL、250pg/mL、50pg/mL和0pg/mL。

5.一种如权利要求1所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取样本15ul、生物素化rT3抗原衍生物30ul和抗体酶标试30ul，孵育15min；

2)向1)中加入磁珠30ul，孵育5min；

3)磁分离2min，去上清；

4)洗涤3次，每次300ul洗液；

5)加入底物200ul，测值。

6.一种如权利要求1所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取样本15ul、酶标rT3抗原衍生物30ul和生物素化rT3兔多抗30ul，孵育15min

2)向1)中加入磁珠30ul，孵育5min；

3)磁分离2min，去上清；

4)洗涤3次，每次300ul洗液；

5)加入底物200ul，测值。