[发明专利]一种紫心马铃薯的组织培养方法

说明书

本发明属于植物组织培养技术领域，具体公开了一种紫心马铃薯的组织培养方法。本发明的组织培养方法包括以下步骤：(1)催芽处理；(2)选取外植体并预处理：剪取块根嫩枝部分的茎段作为外植体；(3)灭菌：用氯化汞溶液浸泡；(4)初代培养：将灭菌后的外植体接种于初代培养基上培养；(5)继代培养：将无菌芽切成茎段后，接种于继代增殖培养基中培养；(6)生根培养：将无菌苗接种于生根培养基中培养，得脱毒试管苗。本发明的组织培养方法利用紫心马铃薯幼嫩芽的茎段作为外植体进行组织培养，利用茎段培养诱导无菌芽，无菌芽成活率和成苗率高，可以生产脱毒试管苗，试管苗健壮且脱毒率高，有效提升了紫心马铃薯的品质。

【技术领域】

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种紫心马铃薯的组织培养方法。

【背景技术】

紫心马铃薯营养价值极高，所含花青素的含量高达4.20mg/100g。花青素具有抗癌、抗衰老、美容和预防高血压等多种保健作用，因此，紫心马铃薯具有很高的营养价值和经济价值，可用作医用营养品。

目前，马铃薯的无性繁殖主要有块茎繁殖、扦插繁殖、分株和压条繁殖和组织培养，而现在马铃薯的大田栽培主要是采用块茎繁殖，块茎繁殖有着诸多优势，但也存在明显的弊端，即种薯用量大、繁殖系数低和病毒易积累，导致了严重的品质退化。

【发明内容】

本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种紫心马铃薯的组织培养方法。本发明紫心马铃薯的组织培养方法利用紫心马铃薯幼嫩芽的茎段作为外植体进行组织培养，实现了紫心马铃薯茎段培养诱导无菌芽，无菌芽成活率和成苗率高，可以生产脱毒试管苗，试管苗健壮且脱毒率高，利于促进紫心马铃薯后续定植的健壮成长，并有效提升了紫心马铃薯的品质。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种紫心马铃薯的组织培养方法，包括以下步骤：

(1)催芽处理：选取健康紫心马铃薯块根，埋在沙床中催芽，隔天浇水、保持沙床湿润；

(2)选取外植体并预处理：待紫心马铃薯块根的芽眼萌发嫩芽长出的苗高至10-15cm时，剪取嫩芽顶端向下5-10cm的嫩枝部分，并剪去叶片、留下0.5cm的叶柄；然后，将所述嫩枝剪成带一个腋芽、且长为1.5cm的茎段；采用质量浓度为1-5g/L的多菌灵溶液浸泡所述茎段10-15min，再用流水冲洗10-15min；

(3)灭菌：用质量浓度为0.1％的氯化汞溶液浸泡上述经过预处理后的外植体4-7min后，无菌水冲洗5次；

(4)初代培养：将上述灭菌后的外植体接种于初代培养基上培养，得无菌芽；所述初代培养基组成为：在1/2MS培养基中添加1.8-2.3mg/L的6-BA、0.2-0.5mg/L的ZT和0.2-0.4mg/L的GA₃；

(5)继代培养：将上述无菌芽切成带一个腋芽的茎段后，接种于继代增殖培养基中培养，得无菌苗；所述继代增殖培养基组成为：在MS培养基中添加1.0-3.0mg/L的6-BA、0.1-0.6mg/L的PP₃₃₃和0.4-0.8mg/L的ZT；

(6)生根培养：将上述无菌苗按单株接种于生根培养基中进行培养，即得脱毒试管苗；所述生根培养基组成为：在1/2MS培养基中添加0.1-0.6mg/L的NAA、1-1.5mg/L的AC和0.1-0.3mg/L的IBA。

进一步的，步骤(3)中，所述氯化汞溶液中滴加有3滴吐温-80。

进一步的，步骤(4)中，所述初代培养基组成为：在1/2MS培养基中添加2.0mg/L的6-BA、0.4mg/L的ZT和0.3mg/L的GA₃。

进一步的，步骤(5)中，所述茎段的长度为1.2-1.5cm。