[发明专利]一种火麻种子诱导愈伤组织的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体公开了一种火麻种子诱导愈伤组织的方法。本发明火麻种子诱导愈伤组织的方法包括以下步骤：(1)预处理：采用超声波对火麻种子进行处理；(2)消毒处理：依次采用酒精和升汞处理火麻种子剥去种皮后得到的火麻仁；(3)接种培养：将上述经过消毒处理的火麻仁接种于诱导培养基中培养，即得火麻愈伤组织。本发明火麻种子诱导愈伤组织的方法利用火麻的种子作为外植体进行组织培养诱导愈伤组织，诱导率高且诱导得到的愈伤组织质量好，为火麻种子的后续培养分化获得大量健壮组培苗提供了基础。

【技术领域】

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种火麻种子诱导愈伤组织的方法。

【背景技术】

火麻，又称为线麻和汗麻等，是桑科火麻属一年生草本植物。火麻籽去皮后为火麻仁，火麻仁中含有多种营养物质，如维生素B、维生素E、树脂、挥发油等成分。火麻仁富含油脂，其油脂油含量为30％，高于大豆的脂肪油含量，不饱和脂肪酸占70％-80％，主要为亚油酸，亚麻酸及油酸，含量分别为0.61％，24.42％，52.32％，其中亚油酸和亚麻酸的比例接近2.5，为人体摄取脂肪酸的最佳比例。其中，不饱和脂肪酸有抗氧化、抗肿瘤、增强免疫力的作用，可以明显降低高密度蛋白血清胆固醇的含量，从而降低心脏病、中风、高血压等疾病的发病率，而亚麻酸含量对高血压、动脉粥样硬化等心血管疾病有较好的防治作用。因此，火麻具有较高的营养价值和保健价值。

目前，火麻的繁殖技术主要以种子繁殖，即有性繁殖为主，存在种子发芽率低、催芽时间长且发芽不一致、产生变异的可能性大等缺点，以上问题严重阻碍了火麻的规模化生产，无法满足市场对火麻的需求。

【发明内容】

本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种火麻种子诱导愈伤组织的方法。本发明火麻种子诱导愈伤组织的方法利用火麻的种子作为外植体进行组织培养诱导愈伤组织，诱导率高且诱导得到的愈伤组织质量好，为火麻种子的后续培养分化获得大量健壮组培苗提供了基础。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种火麻种子诱导愈伤组织的方法，包括以下步骤：

(1)预处理：挑选完整饱满、大小均一的火麻种子，用流水冲洗后，采用超声波处理20min，并将火麻种子保持浸泡在介质中30-50min，其中，处理前10min的介质为40-45℃的水，处理后10min的介质为GGR溶液；将超声波处理后的火麻种子放入铺有湿布的培养皿中，再盖上一层湿布后，于25℃下放置8-10h；

(2)消毒处理：将上述经过预处理的火麻种子剥去种皮后得火麻仁，用流水将所述火麻仁冲洗10-20min后，用体积分数为70％-75％的酒精处理15-30s，再用无菌水冲洗3次，再用质量分数为0.1％的升汞处理8-11min，最后用无菌水冲洗3次；

(3)接种培养：将上述经过消毒处理的火麻仁接种于诱导培养基中培养，即得火麻愈伤组织；所述诱导培养基的组成为：在MS培养基中添加2.0-2.3mg/L的2,4-D、0.1-0.3mg/L的6-BA、1-2mg/L的GGR和0.1-0.2mg/L的GA₃。

进一步的，步骤(1)中，所述超声波的功率为100-120W、频率为30KHz。

进一步的，步骤(1)中，所述GGR溶液的质量浓度为25-35mg/L。

进一步的，步骤(2)中，所述无菌水冲洗的时间为60-70s/次。

进一步的，步骤(3)中，所述培养过程为：暗培养3-6d后转光照培养，光照时间12-14h/d，光照强度为1500-1800lx。

进一步的，步骤(3)中，所述诱导培养基的组成为：在MS培养基中添加2.1mg/L的2,4-D、0.2mg/L的6-BA、1.3mg/L的GGR和0.1mg/L的GA₃。