[发明专利]一种新型双靶向果胶‑多臂聚乙二醇联合抗癌药物的制备

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用天然植物多糖果胶作为药物载体制备新型抗癌药剂，具体一种新型双靶向果胶-多臂聚乙二醇联合抗癌药物的制备方法，属于高分子材料应用、先进纳米技术和生物制药领域。

背景技术

自从屠呦呦发现青蒿素以来，青蒿素的衍生物也随之被发现，其中双氢青蒿素的抗疟疾效果是青蒿素的几十倍，具有抗炎调节免疫作用，近几年人们发现其具有抗肿瘤、抗始发突变、诱导癌细胞凋亡的作用，如黑色素瘤、结肠癌、乳腺癌、肺癌等。可以通过多种抑制途径杀死癌细胞，然而其水溶性差、半衰期短、血液循环时间短等限制了双氢青蒿素在临床的应用，现有的解决办法是通过包埋的方法将药物输送到病灶，然而单纯的包埋易发生突释现象，给患者带来负担。

果胶属天然植物多糖，无毒，主要从柑橘、苹果、柚子皮和香蕉皮中提取，广泛用作增稠剂和凝胶剂。果胶主要由半乳糖醛酸组成，其中半乳糖凝集素-3(Gal-3)配体具有识别干预肿瘤生长作用，果胶不能在胃肠道被消化，通过结肠菌群发酵降解，可减少结肠癌风险，因此对结肠癌具有靶向性，同时诱导细胞凋亡，抑制转移，是不可多得的载体材料。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型双靶向果胶-多臂聚乙二醇联合抗癌药物的制备方法，该方法的载体材料生物相容性好、无毒，双靶向、双载药功能，联合抗癌的功效。

本发明的上述目的通过以下技术方案实现：双靶向纳米药物是由氨基化的叶酸修饰果胶，与载双氢青蒿素的多臂聚乙二醇耦合形成前体药物，再与另一种疏水药物羟基喜树碱以一定比例混合，自组装得到对结肠癌具有双靶向功能的叶酸-(果胶-多臂聚乙二醇)-双氢青蒿素/羟基喜树碱纳米药物。具体步骤如下：

(1)取适量叶酸溶于二甲基亚砜中，加入激活剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，反应30分钟，再加入适量乙二胺，吡啶，常温避光反应24小时得到氨基化的叶酸，转移到透析膜内，透析过夜，收集透析膜内耦合物溶液，冷冻干燥，得到黄色粉末；

(2)取适量氨基化的叶酸和果胶溶于去离子水，加入激活剂EDC反应30分钟，再加入催化剂4-二甲氨基吡啶(DMAP)反应24h，将反应后的溶液透析过夜，收集透析膜内耦合物溶液，冷冻干燥，得到叶酸-果胶黄色粉末；

(3)将多臂聚乙二醇溶于吡啶中，加入激活剂EDC反应30分钟，然后加入抗癌药物双氢青蒿素(DHA)和催化剂DMAP，通氮气，35℃下搅拌反应48小时，向反应后的药液混合物中加入三倍体积乙醚(相对于溶液体积)沉淀出多臂聚乙二醇-双氢青蒿素耦合物，4000转离心收集沉淀，并用乙醚多次洗涤离心，将最终得到的沉淀物用少量去离子水溶解，转移到透析膜内，透析过夜，收集透析膜内耦合物溶液，冷冻干燥，得到多臂聚乙二醇-双氢青蒿素耦合物白色粉末；

(4)取适量多臂聚乙二醇-双氢青蒿素耦合物，溶解在二甲基亚砜中，加入激活剂EDC反应30分钟，然后加入叶酸修饰的果胶和催化剂DMAP，通氮气，35℃避光反应48小时，向反应后的药液混合物中加入三倍体积乙醚(相对于溶液体积)沉淀出叶酸-果胶-多臂聚乙二醇-双氢青蒿素耦合物前药，4000转离心收集沉淀，并用乙醚多次洗涤离心，将最终得到的沉淀物用少量去离子水溶解，转移到透析膜内，透析过夜，收集透析膜内耦合物溶液，冷冻干燥，得到叶酸-果胶-多臂聚乙二醇-双氢青蒿素黄色粉末；

(5)取适量叶酸-果胶-多臂聚乙二醇-双氢青蒿素耦合物溶解在二甲基亚砜中，搅拌均匀，逐滴滴入磷酸缓冲溶液中(PBS，pH＝7.4)，将得到的纳米粒子溶液透析，每隔6小时更换透析外液，收集透析膜内液体，冷冻干燥，得到叶酸-果胶-多臂聚乙二醇-双氢青蒿素纳米粒子粉末；

(6)取适量叶酸-果胶-多臂聚乙二醇-双氢青蒿素耦合物和疏水药物羟基喜树碱溶于二甲基亚砜，搅拌均匀，逐滴滴入磷酸缓冲溶液中(PBS，pH＝7.4)，将得到的纳米粒子溶液透析过夜，每隔6小时更换透析外液，收集透析膜内液体，冷冻干燥，得到叶酸-果胶-多臂聚乙二醇-双氢青蒿素/羟基喜树碱纳米粒子粉末。优选地，多臂聚乙二醇可以选择不同的官能团末端基，与不同亲水或疏水药物发生反应，形成新的化学键，通过自组装的方式与另一种疏水药物形成纳米粒子。如阿霉素、雷公藤甲素。

优选地，包埋药物羟基喜树碱可以由其它疏水性强的药物替代，也可以是金属纳米粒子，实现药物更多功能化应用，且药物的包埋率可控。

优选地，具有靶向肿瘤功能的叶酸也可以由其他药物代替，可以针对不同的肿瘤连接不同的靶向基团