[发明专利]一种干细胞面膜液的制备方法及面膜液包装盒

权利要求书

1.一种干细胞面膜的制备方法，其特征在于：它由下列步骤组成：

1)复苏、培养：复苏106液氮冷冻的脐带间充质干细胞，无菌条件下将其放入无菌离心管中并用无菌生理盐水进行洗涤，在200～250g条件下离心5-10min，弃上清液后将细胞缓慢混悬，然后将其转至75cm2的细胞培养瓶中，加入20ml间充质干细胞无血清培养基，放入37℃、5％浓度的二氧化碳培养箱内进行贴壁培养；

2)传代：待步骤1)中复苏的脐带间充质干细胞成活并贴壁培养达到70％后，加入10-15ml 0.25％的胰蛋白酶消化液，在37℃环境下消化3-5min后加入10-15ml的无血清培养基以终止胰蛋白酶消化反应，然后缓慢吹打消化后的细胞使之完全悬浮，在220-280g条件下离心5-10分钟，用无菌生理盐水洗涤两次后，加入20ml无血清培养基，将细胞以106每瓶的比例再次置于75cm2细胞培养瓶中，放入37℃、5％浓度的二氧化碳培养箱内进行贴壁培养，培养过程中需隔天半量换液补充无血清培养基；

3)细胞破碎：待步骤2)中的脐带间充质干细胞贴壁培养达到90％后，收集上清细胞液Y0；加入20ml无菌生理盐水洗涤两次后，向贴壁细胞中加入10-15ml0.25％胰蛋白酶细胞消化液，在37℃环境下消化3-5min后加入10-15ml的无血清培养基以终止胰蛋白酶消化反应，将其收集至另一无菌离心管中，无菌生理盐水洗涤两次后得到细胞体，然后向该离心管中加入10ml上清细胞液，并吹打混悬，然后将其放置到超声波破碎仪下破碎后制得干细胞液混悬液X0；单次超声破碎时间为5秒，每超声破碎5秒后暂停15秒，累计超声破碎时间为10分钟，超声破碎过程中细胞混悬液始终放置在0℃冰水混合物当中；

4)浓缩、提取：对步骤3)中收集的上清细胞液Y0进行超滤浓缩，使其以1:3的比例浓缩制得Y1浓缩液；将步骤3)中的破碎干细胞液X0在5000rpm/min的条件下离心8-12min后，收集该上清液并将其通过0.45μm的微孔滤膜进行过滤，制得Y2浓缩液；

5)面膜液制备：将Y1浓缩液和Y2浓缩液以1:1的比例进行混合，制得面膜液；

6)面膜粉配制：将重量百分比为50％的烟酰胺、重量百分比为30％的维生素C、重量百分比为10％的黄原胶、重量百分比为10％的卡波姆胶均匀混合。即可制得面膜粉。

2.一种如权利要求1所述的干细胞面膜的包装盒，其特征在于：包括储液管(1)、隔液层(2)和密封盖(3)，所述储液管(1)和隔液层(2)均为底面密封、顶面开口的圆筒形结构，所述密封盖(3)装在储液管(1)顶部并与储液管(1)之间通过螺纹连接，所述隔液层(2)设在储液管(1)内腔中，所述隔液层(2)外径与储液管(1)内径相同，所述隔液层(2)的外壁与储液管(1)内壁之间设有密封圈(4)；所述隔液(2)层底面设有向下的圆柱形凸起(5)；

所述储液管(1)用于存放面膜液，所述隔液层(2)用于存放面膜粉。

3.根据权利要求2中所述的干细胞面膜的包装盒，其特征在于：所述储液管(1)为硬质塑料材质，所述储液管(1)为棕色或磨砂白色。