[发明专利]一种干细胞面膜液的制备方法及面膜液包装盒

说明书

本发明涉及一种干细胞面膜液的制备方法及面膜液包装盒，属于面膜技术领域。本发明主要解决现有干细胞面膜存在的美白功能差、不易包装运输等技术问题。本发明的技术方案是：一种干细胞面膜的制备方法，它由下列步骤组成：1)复苏、培养；2)传代；3)细胞破碎；4)浓缩、提取；5)面膜液制备；6)面膜粉配制。一种干细胞面膜包装盒，其中：包括储液管、隔液层和密封盖，所述储液管和隔液层均为底面密封、顶面开口的圆筒形结构；所述密封盖装在储液管顶部并与储液管之间通过螺纹连接；所述隔液层设在储液管内腔中。本发明具有美白护肤、稳定性高、方便运输保存等优点。

技术领域

本发明属于面膜技术领域，特别涉及一种干细胞面膜液的制备方法及面膜液包装盒。

背景技术

干细胞具有很强的分裂及增生能力，可分泌多种细胞因子，促进周围组织再生，降低炎症性反应，可起到活化细胞、柔嫩肌肤，提高皮肤活性的功效，特别是当用户皮肤有较为严重的痤疮、皮炎等症状时，可起到有效缓解皮肤炎症，弱减痤疮的效果。

但是现有的干细胞面膜的美白效果却不明显；而且干细胞在生长过程当中分泌出多种细胞因子，而这些细胞因子都是具有活性的蛋白分子，对环境的温度要求较高，普通运输环境会导致活性蛋白的失活及降解。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种干细胞面膜液的制备方法及面膜液包装盒，解决现有干细胞面膜存在的美白功能差、不易包装运输等技术问题。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种干细胞面膜的制备方法，它由下列步骤组成：

1)复苏、培养：复苏106液氮冷冻的脐带间充质干细胞，无菌条件下将其放入无菌离心管中并用无菌生理盐水进行洗涤，在200～250g条件下离心5-10min，弃上清液后将细胞缓慢混悬，然后将其转至75cm2的细胞培养瓶中，加入20ml间充质干细胞无血清培养基，放入37℃、5％浓度的二氧化碳培养箱内进行贴壁培养；

2)传代：待步骤1)中复苏的脐带间充质干细胞成活并贴壁培养达到70％后，加入10-15ml 0.25％的胰蛋白酶消化液，在37℃环境下消化3-5min后加入10-15ml的无血清培养基以终止胰蛋白酶消化反应，然后缓慢吹打消化后的细胞使之完全悬浮，在220-280g条件下离心5-10分钟，用无菌生理盐水洗涤两次后，加入20ml无血清培养基，将细胞以106每瓶的比例再次置于75cm2细胞培养瓶中，放入37℃、5％浓度的二氧化碳培养箱内进行贴壁培养，培养过程中需隔天半量换液补充无血清培养基；

3)细胞破碎：待步骤2)中的脐带间充质干细胞贴壁培养达到90％后，收集上清细胞液Y0；加入20ml无菌生理盐水洗涤两次后，向贴壁细胞中加入10-15ml0.25％胰蛋白酶细胞消化液，在37℃环境下消化3-5min后加入10-15ml的无血清培养基以终止胰蛋白酶消化反应，将其收集至另一无菌离心管中，无菌生理盐水洗涤两次后得到细胞体，然后向该离心管中加入10ml上清细胞液，并吹打混悬，然后将其放置到超声波破碎仪下破碎后制得干细胞液混悬液X0；单次超声破碎时间为5秒，每超声破碎5秒后暂停15秒，累计超声破碎时间为10分钟，超声破碎过程中细胞混悬液始终放置在0℃冰水混合物当中；

4)浓缩、提取：对步骤3)中收集的上清细胞液Y0进行超滤浓缩，使其以1:3的比例浓缩制得Y1浓缩液；将步骤3)中的破碎干细胞液X0在5000rpm/min的条件下离心8-12min后，收集该上清液并将其通过0.45μm的微孔滤膜进行过滤，制得Y2浓缩液；

5)面膜液制备：将Y1浓缩液和Y2浓缩液以1:1的比例进行混合，制得面膜液；