[发明专利]一种免疫电化学分析仪在审
| 申请号： | 201711240404.8 | 申请日： | 2017-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN108152483A | 公开（公告）日： | 2018-06-12 |
| 发明（设计）人： | 高任峰;陈晓乐 | 申请（专利权）人： | 苏州峰通光电有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/53 | 分类号： | G01N33/53;G01N27/327 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 215600 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 免疫电化学 分析仪 酵母菌 电化学分析仪 抗原结合活性 生物医药技术 循环肿瘤细胞 电化学分析 肿瘤标记物 高效检测 工作电极 特异性强 准确度 低成本 种检测 检测 尿液 制备 肿瘤 血液 | ||
1.一种免疫电化学分析仪，其特征在于，所述电化学分析仪的工作电极上连接有酵母菌。
2.根据权利要求1所述的电化学分析仪，其特征在于，所述酵母菌为基因工程改造的酿酒酵母菌。
3.根据权利要求2所述的电化学分析仪，其特征在于，所述酵母菌包含表面展示系统。
4.根据权利要求3所述的电化学分析仪，其特征在于，所述表面展示系统包括表面多肽序列，所述表面多肽序列为具有抗原结合活性的氨基酸序列，所述表面多肽序列具有电极结合活性，优选地，所述表面多肽序列具有金属电极结合活性。
5.根据权利要求4所述的电化学分析仪，其特征在于，所述氨基酸序列选自SEQ ID NO.6或SEQ ID NO. 7，所述氨基酸可包含一个或多个多肽，所述多肽包括抗原识别多肽和/或抗体，所述抗原识别多肽和/或抗体位于所述多肽的N端、C段或者中间。
6.根据权利要求3-5任一所述的电化学分析仪，其特征在于，所述酵母表面展示系统的制备方法包括：
将编码相应于权利要求4所述表面多肽序列的多核苷酸序列或编码相应于SEQ ID NO.6或SEQ ID NO. 7的多核苷酸序列连接入克隆载体中，获得重组克隆载体pHE1；
pHE1质粒直接用LiCl法或电转法转化酿酒酵母，在MD平板上挑取His+转化子，提取基因组DNA作为模板，设计引物进行PCR扩增，得到的重组菌E3，阳性克隆菌株E3保存于-80C冰箱；
所述阳性克隆菌株E3表达时经菌株复苏后在SD-His液体培养基中生长到特定密度后换到含Galatose的诱导培养基中24小时诱导蛋白表达并展现在细胞表面。
7.根据权利要求6所述的电化学分析仪，其特征在于，所述工作电极的制备方法包括：将表达后的酵母置于含PBS和BSA的溶液中，将工作电极浸泡在上述溶液中30分钟至24小时，优选地为18小时，酵母菌表面的抗体通过GBP和His-Tag吸附在工作电极表面，制成酵母菌免疫电极在1% BSA溶液中浸泡1小时以封闭非特异性抗原结合位点。
8.根据权利要求6所述的电化学分析仪，其特征在于，所述工作电极为金属电极。
9.根据权利要求1-8任一所述的电化学分析仪，其特征在于，所述电化学分析仪用于检测蛋白。
10.根据权利要求9所述的电化学分析仪，其特征在于，所述蛋白包括肿瘤标记物。
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