[发明专利]一种原肌球蛋白快速检测免疫磁珠层析试纸条及其应用有效
申请号: | 201711240546.4 | 申请日: | 2017-11-30 |
公开(公告)号: | CN107727870B | 公开(公告)日: | 2020-10-16 |
发明(设计)人: | 卢瑛;林昕 | 申请(专利权)人: | 上海海洋大学 |
主分类号: | G01N33/68 | 分类号: | G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/543;G01N1/28 |
代理公司: | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人: | 李庆 |
地址: | 201306 上*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 肌球蛋白 快速 检测 免疫 层析 试纸 及其 应用 | ||
1.一种原肌球蛋白快速检测免疫磁珠层析试纸条,其特征在于,包括底板和底板的上表面自一端至另一端依次粘贴有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫;所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次交错粘贴在底板;所述结合垫为经抗Tm特异性鼠系单克隆抗体修饰的磁珠标记的结合垫;所述硝酸纤维素膜为预包被有Tm检测抗原的检测线和山羊抗小鼠IgG的控制线的硝酸纤维素膜;所述经抗Tm特异性鼠系单克隆抗体修饰的磁珠标记的结合垫的制备方法为将磁珠溶解在的样品垫处理液和结合垫处理液的混合溶液后,匀速滴加在结合垫上;所述样品垫处理液为含有0.1-0.3g/ml聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、1-2.5%体积百分比的吐温-20的硼酸缓冲溶液;所述结合垫处理液为含有0.01-0.03g/ml蔗糖、0.01-0.03g/ml牛血清白蛋白(BSA)的硼酸缓冲溶液;所述磁珠与混合液的体积比为1:25-30;所述样品垫处理液和结合垫处理液的体积比为1:2;
其中,所述原肌球蛋白快速检测免疫磁珠层析试纸条的应用方法,包括以下步骤:
(1)将丙酮抽提至无色的虾肉加入Tris-HCl缓冲液中,混匀,在沸腾状态下加热3-8min,迅速冷却,离心,取上清液用于检测;所述丙酮抽提至无色的虾肉时,虾肉和丙酮的比值为1g:4-6mL;所述Tris-HCl缓冲液为含0.4-0.6mol/L NaCl,pH 9.2;所述虾肉和Tris-HCl缓冲液中质量与体积比为1:4-6;所述混匀的方法为搅拌30-50s,超声混合8-12min;
(2)将步骤(1)中的上清液加到试剂盒的样品垫上,仅控制线出现明显条带即为样品中含有原肌球蛋白。
2.根据权利要求1中所述原肌球蛋白快速检测免疫磁珠层析试纸条,其特征在于,所述原肌球蛋白快速检测免疫磁珠层析试纸条还包括覆盖于样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫上层的透明塑料密封膜。
3.根据权利要求1中所述原肌球蛋白快速检测免疫磁珠层析试纸条的应用方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将丙酮抽提至无色的虾肉加入Tris-HCl缓冲液中,混匀,在沸腾状态下加热3-8min,迅速冷却,离心,取上清液用于检测;所述丙酮抽提至无色的虾肉时,虾肉和丙酮的比值为1g:4-6mL;所述Tris-HCl缓冲液为含0.4-0.6mol/L NaCl,pH 9.2;所述虾肉和Tris-HCl缓冲液中质量与体积比为1:4-6;所述混匀的方法为搅拌30-50s,超声混合8-12min;
(2)将步骤(1)中的上清液加到试剂盒的样品垫上,仅控制线出现明显条带即为样品中含有原肌球蛋白。
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