[发明专利]一种原肌球蛋白快速检测免疫磁珠层析试纸条及其应用

说明书

本发明属于检测领域，具体涉及甲壳类水产品虾蟹软体动物等水产品中原肌球蛋白，适用于现场快速检测甲壳类水产品中原肌球蛋白的样品前处理方法及其检测试剂盒。包括底板和底板的上表面自一端至另一端依次粘贴有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次交错粘贴在底板；所述结合垫经抗原肌球蛋白(Tm)特异性鼠系单克隆抗体修饰的磁珠标记的结合垫；所述硝酸纤维素膜为预包被有Tm检测抗原的检测线和山羊抗小鼠IgG的控制线的硝酸纤维素膜。本发明中，一种适用于现场快速检测甲壳类水产品中原肌球蛋白的样品前处理方法及其快速检测试剂盒；可以在肉眼可见范围内达到检测样品中的原肌球蛋白含量为5μg/mL。

技术领域

本发明属于检测领域，具体涉及甲壳类水产品虾蟹软体动物等水产品中原肌球蛋白，适用于现场快速检测甲壳类水产品中原肌球蛋白的样品前处理方法及其检测试剂盒。

背景技术

水产品中虾、蟹和龙虾为甲壳类主要过敏食物，而原肌球蛋白是其中最主要的过敏原，其引起的过敏症状日趋复杂和严重，且传统的烹饪手段并不能降解原肌球蛋白，所以经常引起食物中毒事件；目前的检测技术以分析全蛋白或酶解后肤段氨基酸序列的质谱技术、检测编码过敏原DNA片段的聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术及分析过敏原性的免疫学检测技术为代表。由于操作要求高并不适用于现场检测；所以开发一种适用于现场检测原肌球蛋白的试剂盒很有必要。

中生北控生物科技股份有限公司发明了一种检测水产类过敏原的胶体金试纸条，其特征是由载体板、硝酸纤维膜等组成(专利号CN201410231103.9)，但其样品前处理复杂不利于现场快速检测。上海海洋大学发明了快速检测原肌球蛋白的磁性免疫层析方法及检测试纸条的制备(专利号CN102043055.A)，用磁信号仪定量检测原肌球蛋白能达到0.15μg/mL，但在检测时要将免疫磁珠加到样品中增加了操作时间，还要借助仪器进行检测且前处理方法繁杂、耗时长。

组合后在检测时只需在试纸条上加上样品液即可进行检测，缩短了检测操作时间；提高了肉眼直接检测的灵敏度，可以达到0.5μg/mL。可以实现在野外简陋条件下的检测。

发明内容

因此本发明的任务是开发出一种既能实现快速检测，又能达到定性检测又能做到定量检测(5μg/mL)目的的试剂盒。

本发明的原肌球蛋白快速检测免疫磁珠层析试纸条，包括底板和底板的上表面自一端至另一端依次粘贴有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次交错粘贴在底板；所述结合垫为经抗Tm特异性鼠系单克隆抗体修饰的磁珠标记的结合垫；所述硝酸纤维素膜为预包被有Tm检测抗原的检测线和山羊抗小鼠IgG的控制线的硝酸纤维素膜。

其中，所述经抗Tm特异性鼠系单克隆抗体修饰的磁珠标记的结合垫的制备方法为将磁珠溶解在的样品垫处理液和结合垫处理液的混合溶液后，匀速滴加在结合垫上；所述磁珠与混合液的体积比为1：25-30；所述样品垫处理液和结合垫处理液的体积比为1：2。优选的，所述匀速滴加的速率为60-70μl/cm。标记了抗体的磁性纳米磁珠均匀滴加于结合垫上，减少了现场将过敏原磁性纳米探针滴加到样品垫的复杂操作。样品处理液和结合垫处理液的混合溶液中样品处理液和结合垫处理液的优选体积比提高了磁珠在这混合液中的溶解度从而提高了检测的灵敏度，使得在检测时只需在试纸条上加上样品液即可进行检测，缩短了检测操作时间；提高了肉眼直接检测的灵敏度，可以达到0.5μg/mL。可以实现在野外简陋条件下的检测。

优选的，所述样品垫处理液为含有0.1--0.3g/ml PVP、1--2.5％体积百分比的吐温-20的硼酸缓冲溶液溶液。

优选的，所述结合垫处理液为含有0.01--0.03g/ml蔗糖、0.01--0.03g/ml BSA的硼酸缓冲溶液。