[发明专利]一种海水养殖鱼多联抗独特型卵黄抗体疫苗及其制备方法

说明书

本发明提供了一种海水养殖鱼多联抗独特型卵黄抗体疫苗的制备方法，包括将海水养殖鱼致病菌灭活后免疫小鼠与家兔；使用6种兔抗病原血清混合后免疫产蛋鸡；筛选产蛋鸡，收集、精制纯化获得抗独特型卵黄抗体粗品与海水鱼病多联抗独特型卵黄抗体疫苗。其中，所述海水养殖鱼致病菌为鳗弧菌，爱德华氏菌，溶藻弧菌，副溶血弧菌，创伤弧菌，链球菌。本发明多联抗独特型卵黄抗体疫苗，可以增强海水鱼对多种鱼病的抵抗力，对多种海水鱼病进行预防；还能通过口服途径免疫接种海水鱼；制备抗独特型卵黄抗体简便易行、取材容易，无菌化处理方便，制备程序简便，成本低，产量高，符合国家节能环保，可持续发展的政策导向。

技术领域

本发明属于水产疫苗领域，具体涉及一种海水养殖鱼多联抗独特型卵黄抗体疫苗及其制备方法。

背景技术

我国是海水养殖鱼产量最大的国家，每年养殖海鱼的数量达70亿尾。随着养殖密度的增加，水环境不断恶化，病害也日渐严重，每年因病害死亡的海水养殖动物给国家造成一百多亿的经济损失。危害我国海水养殖动物的病害主要为细菌病和病毒病。细菌病如鳗弧菌，爱德华氏菌，副溶血弧菌，创伤弧菌，链球菌，溶藻弧菌；病毒病如虹彩病毒，虾白斑病毒及神经坏死病毒等，它们是导致海水养殖动物大批死亡的元凶。

一直以来，用于应对海水养殖动物疾病的手段主要有大量使用抗生素和化学药物，但是这些药物的长期大量使用，已经引起严重的抗药耐药，环境污染及药物残留，最终通过食物链危害人类的健康。所以许多国家及我国政府正逐渐禁止使用抗生素和化学药物来对海水养殖动物进行防病治病，一大批抗生素及化学药物已被许多国家及我国政府列入海水养殖动物违禁药物名单。

疫苗及生物制剂符合对环境无污染，无耐药，无残留等特点，已成为当今世界水生动物疾病防控的主流产品。目前全世界获得生产批文的水产养殖动物疫苗已有100多种，但大多数都是传统的灭活疫苗和减毒活疫苗，这些疫苗的主要缺陷是毒副作用不能完全避免。我国迄今获得批文的鱼用疫苗仅有三个产品：草鱼出血病活疫苗，爱德华氏菌减毒活疫苗，和牙鲆鱼多联抗独特型抗体疫苗。然而迄今国内外均没有抗独特型卵黄抗体疫苗的报道，

现有灭活疫苗及减毒活疫苗的制备方案是：首先用发酵罐或其它方法大量扩增繁殖病原(病菌或病毒)，然后用化学或物理方法对其进行灭活或减少其活性，即成灭活疫苗或减毒活疫苗。这种疫苗的主要缺点是灭活或减毒方法只能消除或减低病原体的生长活性，但不能消除病原本身含有的内外毒素，处理不当很容易产生毒副作用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种海水养殖鱼多联抗独特型卵黄抗体疫苗的制备方法，包括以下步骤：

1)、将海水养殖鱼致病菌半数致死量浓度的菌液，灭活后加入佐剂免疫小鼠与家兔；

2)、分别收集小鼠与家兔的血清，使用6种兔抗病原血清混合后加入佐剂免疫产蛋鸡；

3)、筛选产蛋鸡，使用间接ELISA法检测高免鸡所产鸡蛋，将含有六种病原菌的抗独特型卵黄抗体且效价在10^-4以上，列为采蛋鸡；

4)、收集产蛋鸡的鸡蛋、分离卵黄、破碎去除杂蛋白，沉淀分层取上清，进一步去除脂蛋白与脂肪后获得抗独特型卵黄抗体粗品；

5)纯化抗独特型卵黄抗体粗品即得海水鱼病多联抗独特型卵黄抗体疫苗。

优选地，本发明所述的海水养殖鱼多联抗独特型卵黄抗体疫苗的制备方法中，所述步骤1)中的海水养殖鱼致病菌为鳗弧菌，爱德华氏菌，溶藻弧菌，副溶血弧菌，创伤弧菌，链球菌。