[发明专利]醋栗番茄PI128216的组织培养方法

说明书

本发明公开了一种醋栗番茄PI128216的组织培养方法。所述的方法包括：(1)种子的灭菌及萌发；(2)愈伤组织的诱导及不定芽的分化；(3)诱导生根等步骤。本发明以鲜有报道且富含抗性基因的野生醋栗番茄PI128216为材料，通过优化激素组合，改善培养条件，建立了一套高效的番茄再生体系。通过该再生体系可快速实现大量醋栗番茄PI128216植株的扩繁，同时也可以实现醋栗番茄PI128216的优质栽培，为建立醋栗番茄PI128216的组织培养方法提供了有效技术手段。

技术领域

本发明涉及一种番茄的组织培养方法，特别涉及一种醋栗番茄PI128216的组织培养方法。本发明属于农业技术领域。

背景技术

番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)作为模式经济作物备受研究者关注，伴随着番茄基因组测序工作的完成，利用基因工程技术改良番茄性状成为必然趋势，而番茄再生体系成功的建立是利用遗传转化技术改良番茄品种(如抗虫、抗病、抗除草剂、抗逆、果实的延熟保鲜等)的重要前提。虽然目前以子叶、下胚轴为外植体建立番茄再生系统已取得成功，但番茄再生体系具有基因依赖性，不同基因型番茄的生理特性、生长条件均不相同，因此不能盲目套用他人的研究结果，需对每个特定番茄品种再生体系的建立进行相应研究，本发明以鲜有报道且富含抗性基因的野生醋栗番茄PI128216为材料，通过优化激素组合，改善培养条件，以期建立一套高效的番茄再生体系。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是建立一种醋栗番茄PI128216的组织培养方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明以野生醋栗番茄PI128216为研究对象，对其幼嫩的子叶和下胚轴进行离体培养，研究不同激素浓度及配比对愈伤组织诱导培养、不定芽分化培养和诱导生根培养的影响。试验发现对醋栗番茄PI128216种子的灭菌，用3％NaClO灭菌5min效果为最佳；最适宜诱导子叶和下胚轴愈伤组织分化的培养基为:MS+0.2mg/L IAA+2.0mg/L 6-BA；最适宜诱导不定芽分化的培养基为：MS+0.1mg/L IAA+3.0mg/L6-BA；最适宜诱导再生苗的生根的培养基为：1/2MS+0.1mg/L NAA。通过本发明建立的醋栗番茄PI128216的组织培养方法，可快速实现大量的植株扩繁，同时也可以实现醋栗番茄PI128216的优质栽培，为植物再生体系研究以及番茄遗传转化体系的构建提供技术手段。

具体的，本发明的一种醋栗番茄PI128216的组织培养方法，包括以下步骤：

(1)将颗粒饱满的醋栗番茄PI128216种子放入无菌水中浸泡4～5h后，用75v/v％酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，然后用3w/v％NaClO溶液浸泡3-5min，之后再用无菌水将种子冲洗3次，用无菌纸将种子表面水分吸干；最后将种子接入种子萌发培养基中，放入人工气候室进行培养获得无菌苗；

(2)愈伤组织的诱导及不定芽的分化

将培养6～8d的无菌苗放入超净工作台内，取子叶和下胚轴进行诱导，将子叶用刀片切成0.4-0.6cm2的小方块，子叶背面向下平铺在愈伤组织培养基中，将下胚轴切成0.5-1.5cm长的小段，接种在愈伤组织培养基中，以诱导愈伤组织的发生；将出愈好的愈伤组织移植到诱导不定芽分化培养基上，之后再进行光照培养，诱导不定芽的分化，每隔10d继代一次；

(3)诱导生根

观察不定芽，当不定芽长至2～3cm时，在超净工作台内用刀片自芽基部切下，将再生苗接种于诱导生根培养基中进行诱导生根，得到醋栗番茄PI128216的组织培养幼苗。

在所述的培养方法中，优选的，步骤(1)中3w/v％NaClO溶液浸泡的时间为5min。