[发明专利]一种基于溴甲酚绿显色法的γ-环糊精含量分光光度测定方法在审

专利信息
申请号: 201711265166.6 申请日: 2017-12-01
公开(公告)号: CN109870444A 公开(公告)日: 2019-06-11
发明(设计)人: 张毅;张昊;牛迁迁;田云;王攀磊 申请(专利权)人: 天津工业大学
主分类号: G01N21/78 分类号: G01N21/78;G01N21/31
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 300387 *** 国省代码: 天津;12
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摘要:
搜索关键词: 环糊精 吸光度 标准曲线 空白溶液 溴甲酚绿 显色法 吸光 蒸馏水 乙酸钠缓冲溶液 乙酸 样品吸光度 定量分析 被测样品 分光光度 恒温水浴 缓冲溶液 空白实验 实验步骤 实验操作 吸光度差 比色管 正相关 参比 定容 摇匀 震荡 绘制 替代
【说明书】:

发明公开一种基于溴甲酚绿显色法的γ‑环糊精(γ‑CD)的定量分析方法。该测定方法采用以下实验步骤:(1)测定溶液的准备;(2)样品吸光值差测定:取0.35mmol/L BCG溶液3mL加入50mL棕色比色管中,随后加入γ‑CD溶液2mL,再以pH=4.4乙酸‑乙酸钠缓冲溶液定容至25mL,震荡摇匀后,于30℃恒温水浴中静置25min,随后在625nm处以缓冲溶液为参比测定其吸光度。在空白实验中,以2mL蒸馏水替代γ‑CD溶液,其余实验操作相同。吸光度差值(ΔA)=样品吸光度(A)‑空白溶液吸光度(A’)(3)标准曲线的绘制:在各管中分别1mmoL/L、2mmoL/L、3mmoL/L、4mmoL/L、5mmoL/L的γ‑CD溶液,按照上述方法测定各自的吸光值差,随后以环糊精浓度为横坐标,被测样品溶液与空白溶液吸光度差ΔA作图,得到一正相关曲线,作为γ‑CD标准曲线。

技术领域

本发明涉及一种γ-环糊精的定量分析方法,具体为一种基于溴 甲酚绿显色法的γ-环糊精含量分光光度测定方法。

背景技术

环糊精(cyclodex t rin,简称CD)是由环糊精葡萄糖基转移酶催化 淀粉或其相关的物质所得到的环状化合物,最常见的有α-CD、β -CD、γ-CD 3种,分别由6、7、8个葡萄糖残基通过α-1,4糖 苷键连接而成。CD环外亲水、环内疏水的性质使其能与各种有机物 作用形成稳定的复合物,改变有机物的某些性质,从而在食品、医药、 农业、化工等领域都具有广泛的用途。在这3种CD中,γ-CD内腔 最大,具有更广泛的包埋客体分子的能力,并且其较高的水溶性、突 出的乳化特性和安全性,使其在食品、制药和化妆品等领域具有很大 的应用空间。而随着γ-CD的生产和应用的日益扩大,就迫切需要 一种简便快速测定产品含量的方法。

已知测定环糊精的方法有荧光染料法,纸层析斑定量法,旋光度 法,还原糖测定法以及高效液相色谱法,各有优缺点。其中高效液相 色谱法结果准确,精度高,且能同时测定α、β和γ三种环糊精各自 的含量。但是色谱需要昂贵的仪器设备,对实验人员的专业技术水平 要求也较高,且测定需要花费较长时间,因此难于在生产单位中广泛 应用。相比较而言,分光光度法需要仪器简单,操作容易,在一定条 件下测定结果与液相色谱法相近,较适于环糊精的一般生产和使用单 位采用。

有关γ-CD的分光光度法测定,国外仅有在1984年及2005年有 过两次报道。Takashi等人最先进行过研究,并确定了以溴甲酚绿(简 称BCG)为指示剂的分光光度法,但其对温度、反应时间等可能影响 测定的因素以及测定范围未作研究,这影响了测定结果的可靠性和准 确性。在国外,江南大学的刘虹等人该方法进行过改进,仍存在较大 不足。此前的测试方法主要不足体现在一下几方面:首先,之前的测 试方法中均采用柠檬酸缓冲体系,由于柠檬酸分子尺寸较大,容易占 据γ-CD空腔,影响BCG-(γ-CD)包结物的形成,从而影响(γ-CD) 测定结果的准确性;其次,此前的方法对测定溶液缓冲容量估计不足, 导致pH值不稳,易造成测定结果出现较大波动;第三,测定取样量 较小,不仅容易造成操作不便,亦容易带来人为误差,影响测定结果 的准确性和稳定性。

基于此前γ-CD测定方法在准确度上、可操作性上以及结果稳定 性上存在的诸多不足,本发明将设计一种基于分光光度测定γ-CD含 量的新方法。本方法中以乙酸/乙酸钠缓冲体系替代了原先的柠檬酸/ 柠檬酸钠缓冲体系,并增大了缓冲容量,极大地稳定了测定体系的 pH,从而提高了测定结果的准确性。此外,在该方法中,还对测定γ -CD的各操作参数及各类因素对测定重复性、准确性的影响进行了系 统的分析。本发明方法的推广将成为γ-CD工业化生产和加工过程中 检测其含量的快速而有效的工具。

发明内容

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