[发明专利]一种基于邻甲酚酞褪色法的γ-环糊精含量分光光度测定方法

说明书

本发明公开一种基于邻甲酚酞褪色法的γ‑环糊精(γ‑CD)含量测定方法。该测定方法采用以下实验步骤：(1)测定溶液的准备；(2)样品吸光值差测定：取0.21mmol/L邻甲酚酞溶液3mL加入50mL棕色比色管中，加入γ‑CD溶液3mL，再以pH＝9.51碳酸钠/碳酸氢钠缓冲溶液定容至25mL，摇匀后于30℃恒温水浴静置15min，在576nm处以缓冲溶液为参比测定吸光度。空白实验中以3mL蒸馏水替代γ‑CD溶液，其余实验操作相同。吸光度差值(ΔA)＝空白溶液吸光度(A′)‑样品吸光度(A)(3)标准曲线的绘制：在各管中分别加入1.5mmoL/L、3mmoL/L、4.5mmoL/L、6mmoL/L、7.5mmoL/L、9mmoL/L的γ‑CD溶液，以上述方法测定各吸光值差，以环糊精浓度为横坐标，吸光度差ΔA为纵坐标作图，得到一正相关曲线，作为γ‑CD标准曲线。

技术领域

本发明涉及一种γ-环糊精的定量分析方法，具体为一种基于邻 甲酚酞褪色法的γ-环糊精含量分光光度测定方法。

背景技术

环糊精(cyclodextrin，简称CD)是由环糊精葡萄糖基转移酶催化 淀粉或其相关的物质所得到的环状化合物，最常见的有α-CD、β -CD、γ-CD 3种，分别由6、7、8个葡萄糖残基通过α-1，4糖 苷键连接而成。CD环外亲水、环内疏水的性质使其能与各种有机物 作用形成稳定的复合物，改变有机物的某些性质，从而在食品、医药、 农业、化工等领域都具有广泛的用途。在这3种CD中，γ-CD内腔 最大，具有更广泛的包埋客体分子的能力，并且其较高的水溶性、突 出的乳化特性和安全性，使其在食品、制药和化妆品等领域具有很大 的应用空间。而随着γ-CD的生产和应用的日益扩大，就迫切需要 一种简便快速测定产品含量的方法。

已知测定环糊精的方法有荧光染料法，纸层析斑定量法，旋光度 法，还原糖测定法以及高效液相色谱法，各有优缺点。其中高效液相 色谱法结果准确，精度高，且能同时测定α、β和γ三种环糊精各自 的含量。但是色谱需要昂贵的仪器设备，对实验人员的专业技术水平 要求也较高，且测定需要花费较长时间，因此难于在生产单位中广泛 应用。相比较而言，分光光度法需要仪器简单，操作容易，在一定条 件下测定结果与液相色谱法相近，较适于环糊精的一般生产和使用单 位采用。

有关γ-CD的分光光度法测定，国内外报道十分稀少，仅有 Takashi及刘虹等人分别在1984年及2005年有过两次报告。在报告 中他们分别以溴甲酚绿为指示剂，利用溴甲酚绿与γ-CD形成包络物 后增色的原理，建立了γ-CD的分光光度测定方法。在此前的建立的测定方法尚存在很大的不足。首先，由于溴甲酚绿增色机理尚不明 确，故以溴甲酚绿为指示剂测定方法的准确性和可靠性尚有待考证； 其次，由于溴甲酚绿指示剂变色范围的限制，故该方法需要在酸性条 件下测定，但由于环糊精不耐酸的特性，很容易造成环糊精的分解， 从而影响测定结果，这也是以溴甲酚绿为指示剂的测定方法存在的一 个最大的问题；第三，此前的测试技术在实验方法上，如缓冲体系的 选择、测定时pH的控制及加样方法等方面尚存在诸多不足，这些实 验方法不足都会直接影响到测定方法的可操作性，及测定结果的准确 性、可靠性和可重复性。

基于酚酞褪色法测定水溶液中β-CD含量的方法，在国内外已 有大量研究报告和较为成熟的测试方法。但经研究证实γ-CD对没 有酚酞指示剂褪色，故酚酞指示剂不能都作为测定γ-CD含量的探 剂使用，再加之溴甲酚绿作为探剂存在的诸多问题，因此找到一种适 合用于γ-CD含量测定的指示剂就成为一个十分重要问题。首先， 这种探剂必须与γ-CD存在显著的褪色效应，其分子能够较为容易 地进入γ-CD空腔，与γ-CD形成包络物并引起指示剂分子构型的转 变，使其最大吸收波长发生变化并使溶液褪色，以保证其在测定γ-C D含量时具有高灵敏性。其次，该指示剂必须具有较为适宜的pH变 色范围，由于环糊精耐碱不耐酸的特性，其测定的pH值应以中性或 弱碱性为宜。