[发明专利]一种CYP2C19基因的快速扩增试剂盒及扩增方法在审
| 申请号： | 201711267084.5 | 申请日： | 2017-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN109868306A | 公开（公告）日： | 2019-06-11 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 新开源鸿辉（广州）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 510145 广东省广州市荔*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 扩增 扩增试剂盒 扩增引物 试剂盒 引物特异性 扩增产物 扩增效率 灵活选择 一盒多用 多重PCR 对引物 缓冲液 错配 位点 引物 条目 检测 | ||
1.一种CYP2C19基因的快速扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒内包括三对扩增引物、Taq酶、dNTPs和缓冲液，其中扩增引物用于扩增CYP2C19*2型、CYP2C19*3型和CYP2C19*17型中的至少两个SNP位点，每对引物分别对应其中一个SNP位点的上下游区域。
2.根据权利要求1所述的CYP2C19基因的快速扩增试剂盒，其特征在于：CYP2C19*2型的扩增模板序列如序列表SEQ ID NO：1所示，CYP2C19*3型的扩增模板序列如序列表SEQ IDNO：2所示，CYP2C19*17型的扩增模板序列如序列表SEQ ID NO：3所示。
3.根据权利要求1所述的CYP2C19基因的快速扩增试剂盒，其特征在于，三对引物的引物序列如序列表SEQ ID NO：4～SEQ ID NO：9所示，其中SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5分别为CYP2C19*2型的上下游扩增引物，SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7分别为CYP2C19*3型的上下游扩增引物，SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9分别为CYP2C19*17型的上下游扩增引物。
4.根据权利要求1所述的CYP2C19基因的快速扩增试剂盒，其特征在于，所述扩增体系中，每个SNP位点的扩增引物和模板的加入量相同。
5.根据权利要求1所述的CYP2C19基因的快速扩增试剂盒，其特征在于，所述扩增试剂盒还包括全血样品PCR缓冲液，所述缓冲液含有100mmol/L Tris-HCl，50mmol/L KCl，pH9.3～9.5。
6.一种采用如权利要求1～5任一项所述的CYP2C19基因的快速扩增试剂盒的扩增方法，其特征在于，所述扩增方法采用的扩增体系为25μL的PCR体系，具体为：
10×PCR buffer 2μL；
Mg2+(25mmol/L)1μL；
dNTPs(25mmol/L)0.6μL；
Taq酶(5U/μL)0.3μL；
CYP2C19*2型、CYP2C19*3型和/或CYP2C19*17型模板各2μL；
CYP2C19*2型、CYP2C19*3型和/或CYP2C19*17型上下游引物(10μmol/L)各1μL；其中引物与模板的类型和数量对应，
无菌双蒸水补齐至25μL。
7.根据权利要求6所述的CYP2C19基因的快速扩增方法，其特征在于，所述扩增方法的反应条件为：94℃预变性5.5min；然后94℃变性30s，58℃退火45s，72℃延伸50s，36个循环后，再次72℃延伸5min。
8.根据权利要求6所述的CYP2C19基因的快速扩增方法，其特征在于：用于PCR扩增的DNA样本为提取后的人全血样品。
9.根据权利要求8所述的CYP2C19基因的快速扩增方法，其特征在于：当采用人全血样品进行PCR扩增时，PCR扩增体系中缓冲液采用全血样品PCR缓冲液。
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