[发明专利]一种CYP2C19基因的快速扩增试剂盒及扩增方法

说明书

本发明公开了一种CYP2C19基因的快速扩增试剂盒及扩增方法，其中试剂盒内包括三对扩增引物、Taq酶、dNTPs和缓冲液，其中扩增引物用于扩增CYP2C19*2型、CYP2C19*3型和CYP2C19*17型中的至少两个SNP位点，每对引物分别对应其中一个SNP位点的上下游区域。本发明采用多重PCR的扩增方法，同时扩增CYP2C19的多个重要SNP位点，且可以根据实际需要灵活选择扩增的位点组合，可以起到一盒多用的作用，试剂盒中的引物特异性高，错配率低，引物长度和T_m值设计合理，扩增产物便于检测分离。一次扩增多条目的产物，不仅大大提高了扩增效率，降低了扩增成本。

技术领域

本发明涉及一种CYP2C19基因的快速扩增试剂盒及扩增方法，属于生物领域，尤其是生物检测领域。

背景技术

药物代谢酶在药物体内代谢过程中起着重要作用，其活性高低直接决定药物作用的强度和持久性。细胞色素P450(CYP450)是人体内的药物代谢主要的酶，参与了40％～50％上市药物代谢，其活性强弱是决定药物代谢速率的重要因素。

CYP2C19酶称为S-美芬妥英-4-羟化酶，是细胞色素P450家族(CYP450)最重要的药物代谢酶之一，CYP2C19的基因多态性影响着氯吡格雷、奥美拉唑、苯妥英钠和地西泮等许多药物的代谢。CYP2C19酶位于肝微粒体内，其编码基因位于人类10号染色体q24.1-24.3位点，野生型为CYP2C19*1/*1型，具有正常酶活性，。但中国人群中常有基因突变，常见突变类型是CYP2C19*2型(第5外显子G681A)和CYP2C19*3型(第4外显子G636A)。CYP2C19*2型和CYP2C19*3型可引起CYP2C19基因编码的酶活性丧失，代谢底物的能力减弱，使血药浓度增高，在常规治疗剂量时易引起蓄积中毒。中国人群中的弱代谢者99％为CYP2C19*2型和CYP2C19*3型等位基因。2006年Sim等发现了一种新的CYP2C19等位基因CYP2C19*17，带有的突变位点是：–806C＞T。CYP2C19*17等位基因在人群中也有较高的频率出现，CYP2C19*17型则引起CYP2C19基因编码的酶活性增强，代谢底物的能力增强，因此需要增加药物剂量。

目前临床或实验室检测CYP2C19基因多态性的方法很多，包括测序法、基因芯片法和荧光定量PCR法等。但各种检测方法均是针对单一的单核苷酸多态性位点(SNP)进行检测的，检测时间较长且检测成本较高，但上述三个突变位点的突变频率较高，单独检测不仅耗时费力且准确率低，难以在短时间内给出位点的定性结论。因而无法实时准确地给予被测者准确的代谢疗效预测和用药指导。

综上，研发一款对CYP2C19基因CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17这3个位点的多态性进行定性检测的快速扩增盒及扩增检测方法，是十分重要的。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的获得一种CYP2C19基因的快速扩增试剂盒及扩增方法。

为实现上述发明目的之一，本发明采用的CYP2C19基因的快速扩增试剂盒的技术方案如下：

所述试剂盒内包括三对扩增引物、Taq酶、dNTPs和缓冲液，其中扩增引物用于扩增CYP2C19*2型、CYP2C19*3型和CYP2C19*17型中的至少两个SNP位点，每对引物分别对应其中一个SNP位点的上下游区域。试剂盒中包含三对引物分别对应三个SNP位点，扩增时可以同时扩增三个SNP位点或任意选择两个位点进行扩增，使得试剂盒的使用更加灵活，并且三对引物经过精确设计，扩增效率高错配低，扩增产物易检测易分离，便于进一步的测序或检测工作的顺利进行。

CYP2C19*2型的扩增模板序列如序列表SEQ ID NO：1所示，CYP2C19*3型的扩增模板序列如序列表SEQ ID NO：2所示，CYP2C19*17型的扩增模板序列如序列表SEQ ID NO：3所示。