[发明专利]一种含四元环的海松烷二萜类化合物及其抗肿瘤用途

权利要求书

1.一种含四元环的海松烷二萜类化合物，其化学结构如下所示：

2.一种如权利要求1所述的含四元环的海松烷二萜类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(A)制备总提物：

a)从平板上挑取少量保藏编号为CCTCC NO：M 2013144的弯孢聚壳菌D-1的菌株的菌丝体，接种到250mL三角瓶中进行种子培养，每个三角瓶装100mL的种子培养基，28℃摇床恒温培养，转速180r/min，培养3.5天获得一级种子液，按照5v/v％接种量接入相同种子培养基，于28℃、180r/min摇床培养3.5d，获得新鲜二级种子液，用于发酵培养；然后将种子培养液接种到2000mL的锥形瓶中进行扩大培养，在装液量为400mL发酵培养基的锥形瓶中按照5v/v％的接种量接入新鲜种子液，置于20℃、180r/min摇床培养10d；当发酵培养至72h、96h、120h时，等量添加乙醇，添加终浓度为4％；

所述的种子培养基配方为：葡萄糖125g/L，硝酸钠3.3g/L，三水磷酸氢二钾0.07g/L，七水硫酸镁0.4g/L，氯化钾0.625g/L，酵母提取物0.7g/L，六水氯化钴3.125mg/L，硫酸亚铁18.75mg/L，无水氯化钙6.5g/L，L-鸟氨酸盐酸盐15g/L；

所述的发酵培养基配方为：蔗糖51.4g/L，硝酸钠3.3g/L，尿素2.5g/L，酵母提取物0.7g/L，三水磷酸氢二钾0.07g/L，七水硫酸镁0.4g/L，氯化钾0.625g/L，七水硫酸亚铁18.75mg/L，无水氯化钙6.5g/L，六水氯化钴3.125mg/L；

b)将步骤a)中培养得到的菌液过滤，分别获得菌体和菌液，菌液用等体积乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液蒸干溶剂，将菌丝体用二氯甲烷：甲醇＝1:1超声提取3次，30min/次，浓缩提取液至无有机溶剂，加水混悬，用等体积乙酸乙酯萃取3次，最后合并菌液、菌体所得浸膏，得总提取物；

(B)分离纯化：

a’)将乙酸乙酯粗提物经减压液相柱色谱，以石油醚:乙酸乙酯＝60:1，50:1，40:1，30:1，20:1，15:1，10:1，5:1，3:1，1:1，0:1为溶剂进行梯度洗脱，根据TLC薄层层析显色合并相似流分，得到12个组分Fr.A–L；

b’)对组分Fr.E进行反相中压液相色谱，进行梯度洗脱，条件为55％–100％甲醇/水，流速20mL/min，洗脱4h，合并同一峰型下的流分，得到13个组分Fr.E1–E13；对组分Fr.E9进行正相硅胶柱色谱，最后经反相高效液相，条件为65％乙腈/水，流速2mL/min，检测波长为306nm，保留时间为54.0分钟，即得Eutypellenone B；

c’)对组分Fr.G进行反相中压液相色谱，进行梯度洗脱，条件为50％–100％甲醇/水，流速10mL/min，洗脱4h，合并同一峰型下的流分，得到13个组分Fr.G1–G13；对组分Fr.G11进行正相硅胶柱色谱，最后经反相高效液相，条件为65％乙腈/水，流速2mL/min，检测波长为302nm，保留时间为34.9分钟，即得Eutypellenone A。

3.一种如权利要求1所述的含四元环的海松烷二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的含四元环的海松烷二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的肿瘤为宫颈癌、乳腺癌、结肠癌、慢性白血病、胰腺癌。