[发明专利]一种MTRR的SNP位点的快速扩增检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种MTRR的SNP位点的快速扩增检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由高效扩增组和焦磷酸测序组组成，其中高效扩增组包括：扩增引物、DNA聚合酶、扩增缓冲液、dNTPs和Mg²⁺，高效扩增组用于MTRR A66G的SNP位点的线性指数PCR扩增；扩增产物退火后经焦磷酸测序组测序，焦磷酸检测组包括：退火引物、DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶、三磷酸腺苷双磷酸酶、dNTP，以及Klenow酶。

2.根据权利要求1所述的MTRR的SNP位点的快速扩增检测试剂盒，其特征在于：扩增引物序列如序列表SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。

3.根据权利要求1所述的MTRR的SNP位点的快速扩增检测试剂盒，其特征在于：退火引物序列如序列表SEQ ID NO：4所示。

4.根据权利要求1所述的MTRR的SNP位点的快速扩增检测试剂盒，其特征在于：所述扩增引物中一个为过量引物，另一个为限制性引物。

5.根据权利要求1所述的MTRR的SNP位点的快速扩增检测试剂盒，其特征在于：所述过量引物的数量是限制性引物的至少10倍。

6.一种采用根据权利要求1～5任一项所述的MTRR的SNP位点的快速扩增检测试剂盒的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)提取DNA样本；

b)以提取出的DNA样本为模板，利用如序列表SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的扩增引物，进行线性指数PCR扩增；

c)将扩增产物进行退火处理，制备单链模板；

d)将制备好的单链模板进行焦磷酸测序，确定SNP位点的基因型。

7.根据权利要求6所述的MTRR的SNP位点的快速扩增检测方法，其特征在于：所述DNA样本为经抽提处理的DNA模板。

8.根据权利要求6所述的MTRR的SNP位点的快速扩增检测方法，其特征在于，线性指数PCR扩增的条件包括：95℃预变性5min，60℃扩增循环，72℃延伸10min，4℃保持。

9.根据权利要求8所述的MTRR的SNP位点的快速扩增检测方法，其特征在于：60℃扩增循环由87℃10s、66℃10s和72℃20s组成一个循环。

10.根据权利要求6所述的MTRR的SNP位点的快速扩增检测方法，其特征在于，扩增产物退火制备单链模板的步骤c具体为：

在扩增产物中加入焦磷酸测序用的DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和Klenow酶，静止3～5min后加入三磷酸腺苷双磷酸酶，加入如序列表SEQ ID NO：4所示的退火引物，室温退火10～15min。