[发明专利]一种慢病毒载体、慢病毒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种慢病毒载体，其特征在于，包括基因元件组成的基因片段，所述基因元件按以下顺序顺次连接：TMEM119启动子、iCre基因、Cx3cr1启动子、loxP位点、DsRed基因和EGFP基因。

2.根据权利要求1所述的慢病毒载体，其特征在于，所述慢病毒载体的基因片段的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.一种慢病毒，其特征在于，所述慢病毒包括如权利要求1或2所述的慢病毒载体。

4.根据权利要求3所述的慢病毒，其特征在于，所述慢病毒转入小胶质细胞中，TMEM119启动子阳性，启动iCre基因表达，loxP位点重组，Cx3cr1启动子阳性，启动EGFP基因表达，小胶质细胞被标记绿色荧光。

5.根据权利要求3所述的慢病毒，其特征在于，所述慢病毒转入血液循环系统来源的巨噬细胞中，TMEM119启动子阴性，不启动iCre基因表达，loxP位点不重组，Cx3cr1启动子阳性，启动DsRed基因表达，巨噬细胞被标记红色荧光。

6.根据权利要求3所述的慢病毒，其特征在于，所述慢病毒转入不包括小胶质细胞的中枢神经系统的细胞中，TMEM119启动子阴性，不启动iCre基因表达，loxP位点不重组，Cx3cr1启动子阴性，不启动DsRed基因表达，细胞无荧光。

7.一种制备如权利要求3-6中任一项所述慢病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)构建如权利要求1或2所述的慢病毒载体；

(2)将步骤(1)所述的慢病毒载体转入感受态细胞中，培养后挑取单克隆细胞进行筛选；

(3)将筛选后的慢病毒载体包装得到所述慢病毒。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述构建的方法为将SEQ ID NO.1的基因片段插入慢病毒包装质粒plenti-MP26782的NotI和XmaI的酶切位点之间。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将SEQ ID NO.1的基因片段和慢病毒包装质粒plenti-MP26782分别采用NotI和XmaI限制性内切酶双酶切，得到的酶切产物采用T4 DNA聚合酶连接为慢病毒载体；

(2)将步骤(1)所述慢病毒载体转入感受态细胞中，培养后挑取单克隆细胞采用NotI/XmaI限制性核酸内切酶酶切后，进行琼脂糖凝胶电泳，筛选慢病毒载体；

(3)将筛选后的慢病毒载体包装得到所述慢病毒。

10.一种检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包含如权利要求3-6中任一项所述的慢病毒。

11.一种如权利要求10所述的检测试剂在特异性活体标记小胶质细胞中的应用。

12.一种特异性活体标记小胶质细胞，其特征在于，所述小胶质细胞为经过权利要求10所述检测试剂处理得到，所述小胶质细胞用于实时观测小胶质细胞的发育、行为或功能中的任意一种或至少两种的组合。