[发明专利]一种海带配子体性别鉴定方法

权利要求书

1.一种海带配子体性别鉴定方法，其特征是，海带雌配子体和雄配子体特异性分子标记各一个，分别命名为SJF和SJM，

SJF核苷酸序列为：

SJM核苷酸序列为：

其中SJF由引物对Sf扩增得到，引物对Sf的序列为：

上游引物5’- GGCCTTCAATCAAGCCAATA -3’

下游引物5’- AAAGTCCACACCGTCGTTTC-3’

SJM由引物对Sm扩增得到，引物对Sm的序列为：

上游引物5’-TAGCATCTTGTTGATCTCGTTG-3’

下游引物5’-CAAGGATAAGCGACCAACTTAC-3’；

具体操作步骤为：

（1）根据水云的性别决定区域碱基序设计多对引物对，从中筛选出了扩增条带稳定，雌、雄特异的两组引物对，利用这两对引物对分别对海带雌、雄配子体基因组DNA进行PCR扩增；雌特异引物对序列为：

上游引物5 ’-GTTGGTATAACGGCGTTGGA-3’

下游引物5’-CACCTCCCCTTAAAGTTGCGGC-3’

雄特异引物对序列为：

上游引物5’-GTGGCCTTCTCTTCGTAGGT-3’

下游引物5’-TCGTCAAGGATAAGCGACCA-3’；

（2）利用pMD18-T载体、大肠杆菌感受态菌株DH5α，进行克隆 ，挑选白色菌落，使用PCR确认载体中插入片段的大小，将含有目的片段的菌液进行测序，根据测序结果，设计多对引物对，再选择实验室保存的多个品种的已知性别的雌 雄配子体克隆进行验证；从中筛选出条带扩增稳定，大小合适的雌、雄特异引物对各一组，分 别为雌特异引物对Sf和雄特异引物对Sm，对应的分子标记分别为SJF和SJM。

2.根据权利要求1所述的一种海带配子体性别鉴定方法，其特征是，是通过检测上述的特异性分子标记来完成的；其步骤包括待检测的海带配子体基因组DNA的提取、PCR扩增、扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测。

3.根据权利要求1所述的一种海带配子体性别鉴定方法，其特征是，用引物对Sf进行扩增，从海带雌配子体基因组DNA中扩增得到一条大小为512bp的特异条带，而且，此扩增条带仅在海带雌配子体基因组DNA扩增中出现，在海带雄配子体基因组DNA中没有此扩增条带；用引物对Sm进行扩增，从海带雄配子体基因组DNA中扩增得到一条大小为300bp的特异条带，而且，此扩增条带仅在海带雄配子体基因组DNA扩增中出现，在海带雌配子体基因组DNA扩增中没有此条带。