[发明专利]一种海带配子体性别鉴定方法

说明书

本发明属于海藻分子遗传学领域，具体涉及一种海带配子体性别鉴定方法。其特征是：海带雌配子体和雄配子体特异性分子标记各一个，分别命名为SJF和SJM，其核苷酸序列分别为SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。SEQ ID NO：5由引物Sf序列SEQ ID NO：3扩增得到；SEQ ID NO：6由引物Sm序列SEQ ID NO：4扩增得到。本发明是通过检测上述的特异性片段来完成的；其步骤包括待检测的海带配子体基因组DNA的提取、PCR扩增、扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测。综上所述，本发明可以明确的鉴定出海带配子体是纯雌、纯雄或雌雄混杂，弥补了现有技术的不足。

技术领域

本发明属于海藻分子遗传学领域，具体涉及一种海带配子体性别鉴定方法。

背景技术

海带(Saccharina japonica)属于褐藻门(Phaeophyta)，褐藻纲(Phaeophyceae)，海带目(Laminariales)，海带科(Laminariaceae)，海带属(Saccharina)的一种大型褐藻，在医药、化工、食品等领域用途广泛。海带的生活史分为明显的两个世代，由二倍体的孢子体和单倍体的配子体组成，孢子体和配子体交替出现，是典型的异型世代交替。方宗熙等最早提出，通过分离雌、雄单个配子体细胞，在连续光照条件下，可只进行营养生长长成丝状体，即无性繁殖系(也称配子体克隆系)，这为海带配子体保种技术和配子体克隆育苗技术的发展奠定了基础。上世纪五十年代末以来，先后有20余个优良品种(系)应用于生产，丰富了我国海带栽培产业对品种的要求，同时也带动了相关产业的发展。利用配子体克隆杂交进行海带新品种的培育可获得具有杂种优势杂交海带，也可作为自交纯化和定向选择的基础材料，“901”海带、“荣福”海带、“东方2号”、“东方3号”、“东方6号”和“东方7号”海带都是利用配子体克隆杂交技术进行直接杂交或杂交后定向选育得到的海带品种。杂交海带培育是目前效率较高的一种海带遗传改良方法。

海带配子体克隆是海带种质资源的保存形式，也是海带杂交育种育苗的材料。分离雌雄配子体进行海带的种质保存可以长期保持其优良性状和纯度。但在配子体长期保持和育苗过程中，难免会遇到雌雄配子体混杂的问题，但从形态学上观察，不能非常明确的辨别配子体是否发生了性别的混杂或混淆。因此，在利用配子体克隆育苗时，无法验证所用配子体是否纯雌或纯雄，也就不能确保杂交得到的孢子体是否为所选亲本的后代，也影响保种效率。以上这些问题在一定程度上困扰着海带配子体保存、育种和遗传学研究。因此，能从分子水平上准确的鉴定海带配子体性别，是海带配子体克隆保种和育苗工作中急需攻克的一项技术。

现有同类技术：中国专利文件CN101280340B公开了能辨别海带雌、雄配子体的特异分子标记，可以对海带配子体性别、单性生殖海带孢子体亲本来源及其后代性别进行鉴定，也可以在细胞核分子水平上对海带性别分化进行研究。中国专利文件CN106834469A公开了一种海带雄配子体特异分子标记，可以对海带雄配子体性别进行快速有效的鉴定，还可用于鉴定单性生殖的孤雌生殖孢子体。中国专利文件CN102660647A公开了一种鉴别海带雌配子体的特异性ISSR-SCAR标记，可以进行海带配子体性别的快速有效鉴定、单性生殖海带孢子体亲本来源及其后代的性别的鉴定。

存在的问题：专利文件CN106834469A可以在海带雄配子体中实现特异扩增，但若雄配子体中混杂了雌配子体，则不能鉴定出来。同理，专利文件CN102660647A也存在同样的问题，而且，申请人利用该专利中的标记对保存的多个品种(品系)的材料进行了性别鉴定，结果显示并不具有广泛的特异性；专利文件CN101280340B中的雌、雄标记在申请人所在实验室保存的多个品种(品系)的材料中进行性别鉴定，结果也显示特异性存在很大的局限性。

所以本发明是对多个品种(品系)进行充分筛选和验证的基础上，开发了海带雌、雄配子体特异标记各一个，可以明确的鉴定出海带配子体是纯雌、纯雄或雌雄混杂。

发明内容