[发明专利]一种邻位连接技术用于定量检测Myo含量的试剂盒、制备及使用方法

权利要求书

1.一种邻位连接技术用于定量检测Myo含量的试剂盒、制备及使用方法，其特征在于：

1)试剂盒主要组成：Myo探针A、Myo探针B、连接缓冲液、qPCR反应液；

2)使用方法：将待测样本加入到反应孔中，再加入Myo探针A和Myo探针B，孵育5-30min后加入到连接缓冲液反应5-30min，最后与qPCR反应液进行混合；

3)检测方法：对上述2)中的最终反应液进行qPCR，测量计算每个反应孔的Ct值。

2.一种邻位连接技术用于定量检测Myo含量的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)Myo探针A的制备；

2)Myo探针B的制备。

3.根据权利要求1所述的Myo探针A和探针B均为抗Myo抗体偶联的寡聚脱氧核苷酸。

4.根据权利要求3所述的抗Myo抗体为针对Myo不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。

5.根据权利要求3所述的Myo探针A上的寡聚脱氧核苷酸a序列为：5’-GCATTGATCTAGTCATTCTAGTTATGTAGGGCCAACGACGACTGCAGATGAATTAATGAGGA-3’。

6.根据权利要求3所述的Myo探针B上的寡聚脱氧核苷酸b序列为：5’-CGTAGCCGGCATATGGTACGACGACATGTACAGATACGACTGACGATCAGTACGTTTAAGGATAC-3’。

7.根据权利要求1所述的一种邻位连接技术用于定量检测Myo含量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的连接缓冲液为0.02％BSA，20mmol/L Tris，50mmol/L KCl，20mmol/LMgCl₂，0.03U/μL DNA连接酶，100mmol/L寡核苷酸桥链。

8.根据权利要求7所述寡聚核苷酸桥链的序列为5’-TCGTACCATATGCCGGCTACGTCCTCATTAATTCATCTG-3’。

9.根据权利要求1所述的一种邻位连接技术用于定量检测Myo含量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的qPCR反应液包含PCR正向引物、PCR反向引物、TaqMan probe、Taq DNA聚合酶。

10.根据权利要求9所述的PCR正向引物序列为5’-ATTGATCTAGTCATTCTAGTTATG-3’、PCR反向引物序列为5’-ATCCTTAAACGTACTGATCGTCAGTCG-3’、TaqMan probe序列为5’-TGAATTAATGAGGACGTAGCCGGCATATGGTAC-3’。