[发明专利]一种邻位连接技术用于定量检测Myo含量的试剂盒、制备及使用方法

说明书

本发明提供了一种邻位连接技术用于定量检测Myo含量的试剂盒。所述试剂盒包括：Myo探针A、Myo探针B、连接缓冲液、qPCR反应液；本发明还公开了所述的一种邻位连接技术用于定量检测Myo含量试剂盒的制备方法，该方法包括：Myo探针A的制备、Myo探针B的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本明首次将邻位连接技术方法应用在Myo的定量检测上，与现有技术方法相比，具有灵敏性高、特异性强、高通量等优点，可提高急性心肌梗死诊断的准确性，具有极大的市场价值。

技术领域

本发明涉及一种邻位连接技术用于体外免疫诊断检测人体内Myo的含量，属于疾病诊断检测领域。

背景技术

肌红蛋白(Myoglobin，Myo)是由一条肽链和一个血红素辅基组成的结合蛋白，大量存在于横纹肌(骨骼肌以及心肌)细胞中的血红素蛋白。心肌或者骨骼肌受损时，肌红蛋白会因为细胞膜的破裂而被释放到血管系统，可以在血液中检测到。肌红蛋白是急性心肌梗死发生后最早可检测的标志物，在急性心肌梗死的早期诊断及鉴别诊断中具有重要的临床意义。

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是临床常见的一种急性缺血性心脏病，其诊断依据主要以心电图特异性变化、血清生化标志物以及临床体征性病史为主。大量临床资料表明，AMI患者中约20.0％的患者早期没有典型的临床症状，约50.0％的患者出现特征性的心电图改变。早诊断、早治疗、早溶栓可明显改善患者疾病预后和降低病死率。MYO是近年来新发现的一种高度灵敏、高度特异性的反映心肌损伤的血清标志物，其广泛存在于心肌组织中。MYO在心肌损伤时迅速地表达，1-3h血内肌红蛋白浓度迅速升高，12h时几乎所有AMI患者的肌红蛋白都升高。因此胸痛发作6-12h内肌红蛋白不升高是排除AMI良好的指标(即阴性指标)，同时也是早期检测AMI最快的指标。由于在AMI后血中肌红蛋白很快从肾脏清除，发病18-30h内可完全恢复到正常水平，所以肌红蛋白的测定有助于在AMI 病程中观察患者有无再梗死或梗死再扩展病症，同时也是溶栓治疗中判断有无再灌注的较敏感而准确的指标诊断、预后的重要指标备受关注。

目前检测Myo含量的常用方法包括有免疫比浊法和化学发光法等。免疫比浊法存在液态的胶乳试剂稳定性不佳，灵敏度低、且定量准确度差。而化学发光法虽然具有操作简单、检测速度快、高通量检测等优点，但是也存在非均相反应、批内批间变异大等缺点。为促进我国急性心肌梗死的诊断水平，本发明提出的基于一种邻位连接技术检测Myo含量的免疫诊断检测方法，具有检测灵敏度高、检测特异性强、样品损耗低、操作简单、检测设备常见等优势，将其应用于急性心肌梗死诊断，可以提高急性心肌梗死判断的准确性，具有极大的市场价值。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种可用于定量检测Myo的检测试剂盒、其制备及使用方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种制备基于邻位连接技术定量检测Myo含量的试剂盒的方法，包括如下步骤：

1)抗Myo抗体偶联寡聚核苷酸的Myo探针A；

2)抗Myo抗体偶联寡聚核苷酸的Myo探针B；

在上述技术方案中，所述抗Myo抗体为针对Myo不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。

根据以上任一技术方案所述所制备的基于邻位连接技术的Myo检测试剂盒。其主要组成包括：

1)Myo探针A；

2)Myo探针B；

3)连接缓冲液；

4)qPCR反应液。

以上任一技术方案所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：包括如下步骤：