[发明专利]一种提高防风愈伤组织中亥茅酚苷含量的培养方法

权利要求书

1.一种以酵母提取物培养的防风愈伤组织为原料制备亥茅酚的方法，其特征在于：

酵母提取物培养的防风愈伤组织的培养方法为：将未用酵母提取物培养的防风愈伤组织均匀切成若干小堆，接种于盛有琼脂培养基的容器中，1L所述琼脂培养基添加有2-4g酵母提取物，培养28-32d后，收集培养物并干燥；

制备亥茅酚的方法包括如下步骤：

步骤S1，将酵母提取物培养的防风愈伤组织喷洒pH值为6.0的酸水过夜，105℃高温蒸制3h；酸水为盐酸水溶液，1kg愈伤组织均匀喷洒15mL盐酸水溶液；过夜指不少于8h；

步骤S2，将蒸制品用75%乙醇水溶液提取，收集提取液，过滤，收集滤液；

步骤S3，滤液上大孔树脂柱富集，大孔树脂型号为AB-8，先用45%乙醇水溶液洗脱8个柱体积，再用55%乙醇水溶液洗脱，收集第4和第5个柱体积洗脱液，浓缩得亥茅酚粗品；

步骤S4，第一次精制：将粗品用pH为7.7的氢氧化钠溶液搅拌混悬，过滤，滤液用盐酸调节pH至6.5后立即过滤得二滤液，将该二滤液置于4℃低温过夜；过夜指不少于8h；

步骤S5，第二次精制：将低温过夜的溶液过滤，收集滤饼，用体积比3:2的甲醇-丙酮溶液重结晶，先用甲醇-丙酮溶液将滤饼超声溶解，再于通风橱静置析晶，析出物洗涤干燥即得。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

未用酵母提取物培养的防风愈伤组织的诱导方法包括：

步骤S1，无菌苗的制备：取饱满的防风种子在无菌水中浸泡，剥去种皮，0.1%氯化汞溶液浸泡10-14min，用无菌水冲洗，吸干种子表面水分，接种到MS培养基上，获得无菌苗，待苗长至3-4cm时备用；

步骤S2，愈伤组织诱导：将无菌苗的叶片剪成小片，接种于灭菌诱导培养基，于pH 5.8-6.0、24-26℃条件培养，每天连续光照11-13h，光强1200-1600Lx，每24-26d继代培养一次。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述小片为0.5cm×0.5cm大小。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：诱导培养基配方为MS+BA 0.5mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖25mg/L+0.7%琼脂。