[发明专利]一种提高防风愈伤组织中亥茅酚苷含量的培养方法

说明书

本发明公开了一种提高防风愈伤组织中亥茅酚苷含量的培养方法，将防风愈伤组织均匀切成若干小堆，接种于盛有琼脂培养基的容器中，培养28‑32d后，收集培养物并干燥，其中：1L所述琼脂培养基还添加有2‑4g酵母提取物。本发明提供的培养方法可以显著提高防风愈伤组织中的亥茅酚苷含量；本发明提供的防风愈伤组织富含亥茅酚苷，可以用作制备亥茅酚的原料；以组织培养的方法制备得到的防风愈伤组织成本低，可以规模化制备，且质量可控，可以克服现有技术中防风药材越来越紧张的不足。

技术领域

本发明属于植物组织培养领域，涉及一种提高防风愈伤组织中亥茅酚苷的培养方法。

背景技术

亥茅酚是一种苯并吡喃酮类化合物，目前常作为合成其它活性物质的原料，具有很高的经济价值(参考文献：中国专利公开号CN104072510A)。

申请人研究发现，如下结构的亥茅酚及其衍生物具有为马兜铃酸及含马兜铃酸的中药减毒的作用，可以降低马兜铃酸的肾毒性。其中，亥茅酚-3’-乙酸酯、3’-O-当归酰基亥茅酚、防风色原酮、防风色酮醇都可以以亥茅酚作为原料经过简单的步骤即可合成制备。

因此，亥茅酚的制备工艺具有很高的产业价值。公开号为CN104072510A的中国专利提供了一种从胀果芹中提取亥茅酚的方法，但是该方法反复使用多种柱层析，无法工业化生产。防风是为伞形科植物防风的干燥根，其中含有如下化学结构的亥茅酚苷，可以以防风为原料先炮制使亥茅酚苷水解成亥茅酚，再提取分离纯化得到亥茅酚。

但是，受草原开荒、掠夺式采挖影响，野生防风资源逐年减少，价格也与日俱增。采用组织培养技术具有速度快、成本低，能在短期内繁殖大量种苗，对于保存防风的种质资源，合理开发利用这一药源，满足市场对防风的大量需求具有现实意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种提高防风愈伤组织中亥茅酚苷的培养方法，该愈伤组织采用组织培养技术可以产业化大量制备，且该愈伤组织中含有较高含量的亥茅酚苷，以该愈伤组织为原料提取制备亥茅酚可以极大降低成本。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

一种提高防风愈伤组织中亥茅酚苷含量的培养方法，将防风愈伤组织均匀切成若干小堆，接种于盛有琼脂培养基的容器中，培养28-32d后，收集培养物并干燥，其中：1L所述琼脂培养基还添加有2-4g酵母提取物。

优选地，将切成小堆的防风愈伤组织接种于盛有25mL琼脂培养基的50mL三角瓶中，每瓶接种愈伤组织1.5g。

优选地，取继代培养至5-7代的愈伤组织。

优选地，所述防风愈伤组织诱导方法包括：

步骤S1，无菌苗的制备：取饱满的防风种子在无菌水中浸泡，剥去种皮，0.1％氯化汞溶液浸泡10-14min，用无菌水冲洗，吸干种子表面水分，接种到MS培养基上，获得无菌苗，待苗长至3-4cm时备用；

步骤S2，愈伤组织诱导：将无菌苗的叶片剪成小片，接种于灭菌诱导培养基，于pH5.8-6.0、24-26℃条件培养，每天连续光照11-13h，光强1200-1600Lx，每24-26d继代培养一次。

优选地，所述小片优选0.5cm×0.5cm大小。

优选地，诱导培养基配方优选MS+BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖25mg/L+0.7％琼脂。

一种采用任一上述培养方法制备的防风愈伤组织。

上述防风愈伤组织在制备亥茅酚中的应用。

优选地，以防风愈伤组织为原料制备亥茅酚的方法包括如下步骤：